Question

【題目】番茄紅素具有一定的抗癌效果。普通番茄合成的番茄紅素易在番茄紅素環(huán)化酶的催化作用下轉化�？茖W家利用基因工程設計的重組DNA（質粒三）能表達出雙鏈RNA（發(fā)卡），番茄細胞可識別雙鏈RNA并將該雙鏈RNA和具有相同序列的單鏈RNA一起降解，從而阻止番茄紅素的轉化，提高番茄紅素的產(chǎn)量。下圖為利用質粒一和目的基因構建重組質粒三的過程示意圖。請回答下列問題：

（1）該基因工程中，“目的基因”是______基因，要想對該目的基因進行體外擴增，可從番茄組織中提取mRNA，通過逆轉錄獲得______用于PCR擴增。PCR擴增目的基因，需要設計相應的引物，設計引物時要避免引物之間出現(xiàn)______。

（2）PCR擴增時，DNA先在高溫下解鏈，然后在溫度緩慢下降的過程中，引物與解開的鏈結合，這個過程叫做退火。退火溫度的設定與引物長度、堿基組成有關。在理想狀態(tài)下，退火溫度足夠低，以保證引物同目的序列有效退火，同時還要足夠高，以減少非特異性結合。合理的退火溫度從55℃到70℃。長度相同但______的引物需要設定更高的退火溫度。

（3）“質粒二”利用______開環(huán)。為了防止其自身環(huán)化，要去除開環(huán)的質粒兩端的______個磷酸基團。

（4）構建質粒三時，最好在目的基因A、B兩端分別加______識別序列，目的是______。

（5）對于培育成功的轉基因番茄植株，“發(fā)卡”在細胞內可以阻止______過程，從而使番茄紅素環(huán)化酶基因“沉默”。

Answer 1

【答案】番茄紅素環(huán)化酶 cDNA 堿基互補配對 GC含量高 BamHⅠ酶 2 Ecl酶、BamHⅠ酶 確保目的基因反向連接 翻譯

【解析】

本題以降低番茄紅素為背景，考查基因工程的相關知識，旨在考查考生信息獲取與知識的遷移運用能力。

（1）將構建的重質粒三導入番茄細胞并成功表達后，阻止了番茄紅素轉化為胡蘿卜素，而該轉化是在番茄紅素環(huán)化酶的催化作用下完成的，由此推知：圖中“目的基因”是番茄紅素環(huán)化酶基因；用PCR技術進行擴增時，需要先以mRNA通過逆轉錄獲得cDNA；引物要與模板DNA結合，故要避免一對引物之間出現(xiàn)堿基互補配對；

（2）DNA分子中，GC之間有3個氫鍵，AT之間有兩個氫鍵，氫鍵含量高的DNA更加穩(wěn)定，故長度相同但GC含量高的引物需要設定更高的退火溫度；

（3）由圖可知，質粒二中含有BamHⅠ的識別序列，故需用BamHⅠ酶開環(huán)；開環(huán)后的質粒兩端有2個游離的磷酸基團，為了防止其自身環(huán)化，需要去除；

（4）構建建質粒三時，需要在目的基因A、B兩端分別加Ecl酶、BamHⅠ酶識別序列，以確保目的基因反向連接；

（5）質粒三導入受體細胞并表達后，形成雙鏈RNA(發(fā)卡）的原因是轉錄后的RNA分子中存在互補配對的堿基序列。雙鏈RNA(發(fā)卡）的形成導致核糖體不能與mRNA的結合，因此“發(fā)卡”在受體細胞內可以阻止翻譯過程，從而使基因“沉默”。