Question

【題目】圖1、圖2中標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點，且限制酶的切點是唯一的，外源DNA插入會導(dǎo)致相應(yīng)的基因失活，請回答下列問題。

（1）基因工程中最常用的載體是_______，而作為基因表達載體，除圖1所示結(jié)構(gòu)外，還需具有___________________________。

（2）根據(jù)圖中所給信息，構(gòu)建基因表達載體時，應(yīng)選用的限制酶是__________________。若將基因表達載體導(dǎo)入大腸桿菌，一般用____________處理，使其處于_____________，以利于吸收周圍環(huán)境中的DNA分子。

（3）為了篩選含目的基因的大腸桿菌，應(yīng)在培養(yǎng)基中添加______________，培養(yǎng)一段時間后，平板上長出的菌落，用PCR技術(shù)鑒定時，所用的引物組成為圖2中_____________。

Answer 1

【答案】質(zhì)粒 目的基因和終止子 BclI和HindⅢ Ca2+ 感受態(tài) 四環(huán)素 引物甲和引物丙

【解析】

本題考查基因工程，考查對基因工程的工具和操作步驟的理解和識記。圖1中氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因為標(biāo)記基因，根據(jù)目的基因兩端限制酶的酶切位點和標(biāo)記基因中的酶切位點可選擇適宜的限制酶，保證基因表達載體中至少一個標(biāo)記基因正常表達。

（1）質(zhì)粒是基因工程中最常用的載體，作為基因表達載體，一般應(yīng)具有啟動子、終止子、目的基因和標(biāo)記基因，圖1結(jié)構(gòu)中缺少目的基因和終止子。

（2）根據(jù)圖中所給信息，兩個標(biāo)記基因中均含有BamHⅠ的酶切位點，因此構(gòu)建基因表達載體時，不能選用該酶，應(yīng)選用BclI和HindⅢ。將基因表達載體導(dǎo)入大腸桿菌，一般用Ca2+處理，增大其細胞壁的通透性，使其處于感受態(tài)，以利于吸收周圍環(huán)境中的DNA分子。

（3）基因表達載體中，目的基因的插入導(dǎo)致氨芐青霉素抗性基因失活，但四環(huán)素抗性基因可以正常表達，篩選含目的基因的大腸桿菌，可在培養(yǎng)基中添加四環(huán)素。用PCR技術(shù)鑒定受體菌是否含有目的基因，所用的引物應(yīng)分別與目的基因兩端的單鏈配對，引物應(yīng)為圖2中的引物甲和引物丙。