Question

【題目】圖1是某基因工程中構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程示意圖，載體質(zhì)粒P0具有四環(huán)素抗性基因(tetr)和氨芐青霉素抗性基因(ampr)。請回答下列問題：

（1）用Taq DNA聚合酶進行PCR擴增獲得的目的基因片段，其兩端各自帶有一個腺嘌呤脫氧核苷酸。載體P1用酶處理，在兩端各添加了一個堿基為________的脫氧核苷酸，形成P2；P2和目的基因片段在________酶作用下，形成重組質(zhì)粒P3。

（2）為篩選出含有重組質(zhì)粒P3的菌落，采用含有不同抗生素的平板進行篩選，得到A、B、C三類菌落，其生長情況如下表(“＋”代表生長，“－”代表不生長)。根據(jù)表中結(jié)果判斷，應(yīng)選擇的菌落是________(填表中字母)類，另外兩類菌落質(zhì)粒導(dǎo)入情況分別是______________________、________________________。

平板類型 菌落類型	A	B	C
無抗生素	＋	＋	＋
氨芐青霉素	＋	－	＋
四環(huán)素	＋	－	－
氨芐青霉素＋四環(huán)素	＋	－	－

Answer 1

【答案】胸腺嘧啶(T) DNA連接 C A類菌落含有P0 B類菌落未轉(zhuǎn)入質(zhì)粒

【解析】

分析題圖：P0是載體質(zhì)粒，其含有的氨芐青霉素抗性基因（ampr）和四環(huán)素抗性基因（tetr）都屬于標記基因，可以用來檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細胞；EcoRV酶為限制酶，其切割質(zhì)粒后會破壞了四環(huán)素抗性基因（tetr）。

（1）分析圖1可知，目的基因兩側(cè)為粘性末端，且游離出的堿基為A，則在載體P1的兩端需要各加一個堿基T，形成具有粘性末端的載體P2，再用DNA連接酶將P2與目的基因連接起來形成重組質(zhì)粒P3。

（2）限制酶切割后破壞了四環(huán)素抗性基因，但是沒有破壞氨芐青霉素抗性基因，因此含有重組質(zhì)粒P3的菌落在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基中不能生長，而在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基中能生長，結(jié)合表格分析可知，應(yīng)該選擇C類菌落。根據(jù)表格分析，A類菌落在氨芐青霉素和四環(huán)素的培養(yǎng)基中都能夠生長，說明其導(dǎo)入的是P0；B類菌落在任何抗生素的培養(yǎng)基中都不能生長，說明其沒有轉(zhuǎn)入任何質(zhì)粒。