Question

【題目】如圖表示血紅蛋白提取和分離的部分實(shí)驗(yàn)裝置，請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：

（1）甲裝置中，B是血紅蛋白溶液，則A是____________。乙裝置中，C溶液的作用是___________。

（2）通過(guò)凝膠色譜法可將從紅細(xì)胞中分離出的血紅蛋白樣品進(jìn)一步________。

（3）在血紅蛋白的提取和分離實(shí)驗(yàn)中有以下操作：

①實(shí)驗(yàn)時(shí)要對(duì)采集到的血液中的紅細(xì)胞進(jìn)行洗滌，其主要目的是________________。

②在蒸餾水和________的作用下，紅細(xì)胞會(huì)破裂釋放出血紅蛋白。

③將釋放出的血紅蛋白收集到透析袋中透析，這是樣品的______，而透析的目的是______。

（4）用乙裝置分離血紅蛋白，待___________________________時(shí)，用試管收集流出液，每5 mL收集一管，連續(xù)收集。實(shí)驗(yàn)最后經(jīng)過(guò)SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行________。

Answer 1

【答案】磷酸緩沖液 洗脫血紅蛋白（洗脫） 純化 去除雜蛋白 甲苯 粗分離 去除樣品中相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì) 紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端 純度鑒定

【解析】

1、蛋白質(zhì)的提取和分離：

（1）原理：凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小來(lái)分離蛋白質(zhì)的有效方法，相對(duì)分子質(zhì)量小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程長(zhǎng)，移動(dòng)的速度慢，相對(duì)分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)不容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程短，移動(dòng)的速度快，因此相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)得以分離。

（2）用磷酸緩沖液處理的目的是讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的pH范圍內(nèi)，維持其結(jié)構(gòu)和功能。

（3）分離血紅蛋白溶液時(shí)，將攪拌好的混合液轉(zhuǎn)移到離心管中，經(jīng)過(guò)中速長(zhǎng)時(shí)離心后，可明顯看到試管中溶液分為4層，從上往下數(shù)，第1層為甲苯層，第2層為脂溶性物質(zhì)的沉淀層，第3層為血紅蛋白水溶液，第4層為雜質(zhì)沉淀層。

（4）氣泡會(huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果。

2、血紅蛋白的提取與分離的實(shí)驗(yàn)步驟主要有：

（1）樣品處理：①紅細(xì)胞的洗滌，②血紅蛋白的釋放，③分離血紅蛋白溶液；

（2）粗分離：①分離血紅蛋白溶液，②透析；

（3）純化：調(diào)節(jié)緩沖液面→加入蛋白質(zhì)樣品→調(diào)節(jié)緩沖液面→洗脫→收集分裝蛋白質(zhì)；

（4）純度鑒定--SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。

3、電泳法是利用待測(cè)樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異和分子本身的大小、形狀不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離或鑒定。

（1）透析是將血紅蛋白溶液裝入透析袋，放入A磷酸緩沖液。乙裝置中C是磷酸緩沖液，溶液的作用是洗脫血紅蛋白。

（2）通過(guò)凝膠色譜法可將從紅細(xì)胞中分離出的血紅蛋白樣品進(jìn)一步純化。

（3）在血紅蛋白的提取和分離實(shí)驗(yàn)中有以下操作：

①實(shí)驗(yàn)時(shí)要對(duì)采集到的血液中的紅細(xì)胞進(jìn)行洗滌，其主要目的是去除雜蛋白；②在蒸餾水和甲苯的作用下，紅細(xì)胞會(huì)破裂釋放出血紅蛋白；③將釋放出的血紅蛋白收集到透析袋中透析，這是樣品的粗分離，而透析的目的是去除樣品中相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)。

（4）用乙裝置分離血紅蛋白，待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時(shí)，用試管收集流出液，每5 mL收集一管，連續(xù)收集。實(shí)驗(yàn)最后經(jīng)過(guò)SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行鑒定。