苦馬豆素(SW)因從灰苦馬豆中分離出來(lái)而得名,被認(rèn)為是“未來(lái)的腫瘤治療藥物”。以下是相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究過(guò)程及結(jié)果。
①將等量的小鼠肝癌Hepal-6細(xì)胞懸液,分別接種于若干個(gè)含有等量培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中;
②將培養(yǎng)瓶放于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,靜置、去除上清液;
③分別加入等量但含不同濃度SW的培養(yǎng)液,于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng);
④分別在24 h、48 h、72 h時(shí)吸取培養(yǎng)液,觀察結(jié)果,得到不同濃度SW對(duì)細(xì)胞存活率影響曲線如圖所示。
請(qǐng)回答下列問(wèn)題。
(1)培養(yǎng)箱中5% CO2的作用是______________________________________。
(2)處于間期的肝癌Hepal-6細(xì)胞,其分子水平的主要變化是________________________________________________________________。
(3)步驟③中需要設(shè)置對(duì)照組,對(duì)照組的處理方法應(yīng)為________。步驟③中每個(gè)實(shí)驗(yàn)組設(shè)置5個(gè)培養(yǎng)瓶同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng),計(jì)數(shù)后統(tǒng)計(jì)平均值,這是為了________________,使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更準(zhǔn)確。
(4)分析圖中曲線可知,SW對(duì)肝癌Hepal-6細(xì)胞作用效果的特點(diǎn)是①______________________________________________________________;
②__________________________________________________________。
(5)將培養(yǎng)48 h的培養(yǎng)液離心,去除上清液后經(jīng)過(guò)一系列的處理及分析,得到培養(yǎng)48 h細(xì)胞數(shù)目及凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表達(dá)量如表所示:
SW | 癌細(xì)胞數(shù)目 | 凋亡細(xì)胞數(shù)目 | Bax蛋白 | Bcl-2蛋白 |
2/(μg·mL-1) | + | +++ | +++++ | + |
1/(μg·mL-1) | ++ | +++ | +++ | ++ |
0.5/(μg·mL-1) | +++ | ++ | ++ | +++ |
0/(μg·mL-1) | ++++ | + | + | ++++ |
注:“+”的數(shù)量表示相對(duì)值的多少
據(jù)此推測(cè),SW可能是通過(guò)誘發(fā)癌細(xì)胞________來(lái)抑制腫瘤生長(zhǎng)的,其原因可能是SW促進(jìn)了癌細(xì)胞內(nèi)________________的表達(dá)。
(1)維持培養(yǎng)液的pH
(2)DNA復(fù)制和有關(guān)蛋白質(zhì)的合成
(3)加入等量不含SW的培養(yǎng)液(或只加等量培養(yǎng)液) 減小誤差
(4)①SW濃度越高,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)(存活)的抑制作用越強(qiáng) ②SW作用時(shí)間越長(zhǎng),對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)(存活)的抑制作用越強(qiáng)
(5)凋亡 Bax蛋白基因
【解析】(1)培養(yǎng)箱中5% CO2的作用是維持培養(yǎng)液的pH。
(2)肝癌細(xì)胞在分裂間期主要進(jìn)行DNA的復(fù)制和有關(guān)蛋白質(zhì)的合成。
(3)該實(shí)驗(yàn)中對(duì)照組應(yīng)加入等量不含SW的培養(yǎng)液。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組設(shè)置5個(gè)培養(yǎng)瓶同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng),計(jì)數(shù)后統(tǒng)計(jì)平均值的目的是減小誤差。
(5)由表格中的數(shù)據(jù)可以推測(cè),SW可能是通過(guò)誘發(fā)癌細(xì)胞凋亡來(lái)抑制腫瘤生長(zhǎng)的,其原因可能是SW促進(jìn)了癌細(xì)胞內(nèi)Bax蛋白(凋亡蛋白)基因的表達(dá)。
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