Question

（14分）綠色熒光蛋白基因（GFP）被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，一直作為一個(gè)監(jiān)測(cè)完整細(xì)胞和組織內(nèi)基因表達(dá)及蛋白質(zhì)位置的理想標(biāo)記。請(qǐng)根據(jù)圖表回答下列問(wèn)題。

（1）若圖中GFP的M端伸出的核苷酸的堿基序列是—TCGA，N端伸出的核苷酸的堿基序列是—TGCA，則在構(gòu)建含該GFP的重組質(zhì)粒A時(shí)，應(yīng)選用的限制酶是                 。③過(guò)程需要的酶是             。

（2）檢測(cè)GFP是否已重組到豬胎兒成纖維細(xì)胞的染色體DNA上，可采用               技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。

（3）用顯微鏡可觀察到用于⑥過(guò)程的豬卵母細(xì)胞的卵黃膜和透明帶之間有         個(gè)極體。用于⑤過(guò)程的豬胎兒成纖維細(xì)胞，一般選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，原因是                                     。

（4）由⑦過(guò)程獲得的重組細(xì)胞培育成綠色熒光轉(zhuǎn)基因克隆豬，涉及到的現(xiàn)代生物技術(shù)手段有                                              。

（5）為了加快繁殖速度，可采用胚胎分割的方法。得到綠色熒光轉(zhuǎn)基因克隆豬（雌性）之后，可用                       處理，使之超數(shù)排卵，提高其繁育能力。

 

Answer 1

【答案】

（14分，每空2分）(1)HindⅢ和PstⅠ    DNA連接酶     

（2）DNA分子雜交  （3）1   10代以內(nèi)的細(xì)胞保持正常的二倍體核型   

（4）早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植（缺一不得分）   （5）促性腺激素

【解析】從圖示可知，運(yùn)載體是用HindⅢ和PstⅠ切割，所以目的基因也必須使用相同的限制酶切割，具有相同的粘性末端，用DNA連接酶把目的基因和運(yùn)載體相連，目的基因是否導(dǎo)入通常利用DNA雜交技術(shù)來(lái)獲得，沒有完成受精作用的次級(jí)卵母細(xì)胞有一個(gè)極體，一般用于核移植的細(xì)胞的細(xì)胞核通常選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，是因?yàn)?0代以內(nèi)的細(xì)胞保持正常的二倍體核型，動(dòng)物基因工程通常是導(dǎo)入受精卵中的在體外涉及動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)成早期胚胎，再通過(guò)胚胎移植到母體內(nèi)發(fā)育，利用促性腺激素對(duì)受體和供體通常采用同期發(fā)情處理，使之超數(shù)排卵，提高其繁育能力便于移植成功。