Question

【題目】【生物——選修3:現(xiàn)代生物科技專題】為增加油菜種子的含油量，科研人員將轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因與酶D基因相連，導(dǎo)人油菜細(xì)胞并獲得了轉(zhuǎn)基因油菜品種。

（1）研究人采用PCR技術(shù)獲取酶D基因和轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因，該技術(shù)是利用 的原理，使相應(yīng)基因呈指數(shù)增加。所含三種限制酶（XbaI、ClaI、SacI）的切點(diǎn)如圖所示，則用 和

（2）將上述融合基因插人上圖所示Ti質(zhì)粒的 中，構(gòu)建基因表達(dá)載體并導(dǎo)人農(nóng)桿菌中。為了獲得含融合基因的單菌落，應(yīng)進(jìn)行的操作是 。隨后再利用液體培養(yǎng)基將該單菌落振蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的侵染液。

（3）剪取油菜的葉片放人侵染液中一段時(shí)間，此過(guò)程的目的是 ，進(jìn)一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜細(xì)胞，依據(jù) 的原理，可將其培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株。

（4）用 法可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因油菜植株中的融合基因是否成功表達(dá)。

Answer 1

【答案】（1）DNA雙鏈復(fù)制 ClaⅠ DNA連接

（2）T-DNA（1分） 將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)

（3）利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜�?xì)胞 細(xì)胞具有全能性

（4）抗原—抗體雜交

【解析】（1）PCR技術(shù)的原理是DNA雙鏈復(fù)制。提取轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因需要XbaI和ClaI，提取酶D基因需要ClaI和SacI，其中由ClaI切割形成的基因末端是相同的，故用ClaⅠ和DNA連接酶處理兩個(gè)基因后，可得到兩基因相連的融合基因。

（2）利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入目的基因，需要將目的基因插入農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒的T-DNA中，所以構(gòu)建基因表達(dá)載體需要將上述的融合基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA中。重組Ti質(zhì)粒上面有四環(huán)素抗性基因，所以篩選含有融合基因的單菌落需要將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)。

（3）剪取油菜的葉片放人侵染液中一段時(shí)間，此過(guò)程的目的是利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜�?xì)胞。進(jìn)一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜細(xì)胞植物組織培養(yǎng)技術(shù)培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株，該過(guò)程依據(jù)的原理是植物細(xì)胞具有全能性。

（4）基因表達(dá)的產(chǎn)物是蛋白質(zhì)，故用抗原—抗體雜交法可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因油菜植株中的融合基因是否成功表達(dá)。