Question

【題目】為了解基因結(jié)構(gòu)，通常選取一特定長度的線性DNA分子，先用一種限制酶切割，通過電泳技術(shù)將單酶水解片段分離，計算相對大��；然后再用另一種酶對單酶水解片段進(jìn)行降解，分析片斷大小。下表是某小組進(jìn)行的相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

（1）由實(shí)驗(yàn)可知，在這段已知序列上，A酶與B酶的識別序列分別為______個和_____個。

（2）根據(jù)表中數(shù)據(jù)，請在下圖中標(biāo)出相應(yīng)限制性酶的酶切位點(diǎn)并注明相關(guān)片斷的大小。_________________

（3）BamH Ⅰ與BglⅡ的識別序列及切割位點(diǎn)如下圖，用這兩種酶和DNA連接酶對一段含有數(shù)個BamHⅠ和BglⅡ識別序列的DNA分子進(jìn)行反復(fù)的切割、連接操作，若干循環(huán)后_______序列明顯增多。

（4）用于基因治療的基因種類有：______________、_____________、_____________。

Answer 1

【答案】 3 2 GGATCT//CCTAGA 從健康人體上分離得到的功能正常的基因 反義基因 自殺基因（或編碼可以殺死癌變細(xì)胞的蛋白酶基因）

【解析】

限制性核酸內(nèi)切酶是可以識別DNA的特異序列，并在識別位點(diǎn)或其周圍切割雙鏈DNA的一類內(nèi)切酶，簡稱限制酶。根據(jù)表格數(shù)據(jù)分析，已知一線性DNA序列共有2100+1400+1000+500=5000bp，其經(jīng)A酶切割后形成2100bp、1400bp、1000bp、500bp共4個片段，說明酶A有3個切割位點(diǎn)；再經(jīng)B酶切割后，2100bp被切割成了1900bp和200bp，1400bp被切割成了800bp和600bp，1000bp和500bp沒有被切割，說明酶B有2個切割位點(diǎn)；同樣的道理，線性DNA經(jīng)B酶切割后形成2500bp、1300bp、1200bp共3個片段，說明酶B有2個切割位點(diǎn)；再經(jīng)A酶切割后，2500bp被切割成了1900bp和600bp，1300bp被切割成了800bp和500bp，1200bp被切割成1000bp和200bp，說明酶A有3個切割位點(diǎn)。

（1）根據(jù)以上分析已知，A酶的識別序列和切割位點(diǎn)為3個，酶B的識別序列和切割位點(diǎn)為2個。

（2）根據(jù)以上分析已知，A酶切割后的片段為2100bp、1400bp、1000bp、500bp，再經(jīng)過B酶后將其中的2100bp切割成了1900bp和200bp，1400bp切割成了800bp和600bp；而B酶第一步水解的產(chǎn)物是2500bp、1300bp、1200bp，再經(jīng)過A酶后將其中的2500bp切割成了1900bp和600bp，1300bp切割成了800bp和500bp，1200bp切割成1000bp和200bp，因此兩者酶的切割位點(diǎn)如圖所示：

。

（3）據(jù)圖分析，兩種限制酶切割后漏出來的堿基序列都是-GATC-，可以發(fā)生堿基互補(bǔ)配對形成或，因此若干循環(huán)后該序列明顯增多。

（4）用于基因治療的基因種類有：從健康人體上分離得到的功能正常的基因、反義基因、自殺基因（或編碼可以殺死癌變細(xì)胞的蛋白酶基因）。