Question

【題目】如圖是利用大腸桿菌生產(chǎn)埃博拉病毒（EBOV）VP40蛋白的過程．請據(jù)圖回答：

（1）①利用PCR技術(shù)擴增目的基因的過程中，反應體系內(nèi)要加入 ， PCR的全稱是 ， 第次復制的產(chǎn)物中才開始出現(xiàn)目的基因．
（2）過程②構(gòu)建基因表達載體時選用EcoRI和XhoI雙酶切的優(yōu)點是 ， 目的基因與質(zhì)粒連接形成重組DNA后含有個游離的磷酸基團．
（3）基因表達載體A的組成除了目的基因外，還必須有 ， 過程③VP40基因進入大腸桿菌細胞，并在大腸桿菌內(nèi)維持穩(wěn)定和表達，該過程可稱為 ．
（4）檢測過程④是否成功表達，通常從分子水平進行檢測的方法是 ．

Answer 1

【答案】
（1）含有VP40基因的DNA、分別與兩條模板結(jié)合的引物、四種脫氧核苷酸和Taq 酶；聚合酶鏈式反應；3
（2）防止酶切產(chǎn)物之間的隨意連接，提高連接成功率；0
（3）標記基因、啟動子、終止子；轉(zhuǎn)化
（4）抗原﹣抗體雜交
【解析】解：（1.）PCR擴增時，需要在一定的緩沖溶液中加入DNA模板、分別與兩條模板結(jié)合的引物、四種脫氧核苷酸和Taq 酶．PCR的全稱是聚合酶鏈式反應，由于引物A和引物B均不在該片段的端點，因此第一輪循環(huán)后，得到的兩DNA片段中兩條脫氧核苷酸鏈都不等長；通過繪圖可推知，第二輪中亦不會出現(xiàn)等長的引物，所以在第三輪循環(huán)產(chǎn)物中開始出現(xiàn)兩條核苷酸鏈等長的DNA片段．
（2.）EcoRI和XhoI切割形成的黏性末端不同，而DNA連接酶只能將具有相同黏性末端的DNA片段連接起來，因此為了防止目的基因反向粘連和質(zhì)粒自行環(huán)化，酶切時可選用的酶是EcoRI和XhoI，提高連接成功率；目的基因與質(zhì)粒連接形成重組DNA后，形成的是環(huán)狀DNA，因此含有0個游離的磷酸基團．
（3.）基因表達載體A的組成除了目的基因外，還必須有標記基因、啟動子、終止子；VP40基因進入大腸桿菌細胞，并在大腸桿菌內(nèi)維持穩(wěn)定和表達，該過程可稱為轉(zhuǎn)化．
（4.）檢測過程④是否成功表達，通常從分子水平進行檢測的方法是抗原﹣抗體雜交．
【考點精析】本題主要考查了基因工程的原理及技術(shù)的相關(guān)知識點，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)才能正確解答此題．