Question

【題目】由于人突變細胞中含胸苷激酶（TK）而缺乏HGPRT酶，小鼠正常細胞中含HGPRT酶而缺乏TK，兩種細胞均不能在HAT培養(yǎng)基中生長，但可在普通培養(yǎng)基中生長。利用上述兩類細胞融合獲得雜種細胞，在雜種細胞傳代過程中，鼠的染色體被保留下來，人的染色體隨機丟失，以至最后只剩一條或幾條人染色體（如下圖，圖中數(shù)字代表保留的人染色體編號）。科研人員運用這一方法確定了胸苷激酶基因所在的染色體。分析回答：

（1）人、鼠細胞融合的原理是______。與植物原生質(zhì)體融合過程相比，過程A特有的誘導(dǎo)方法是______。

（2）動物細胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素的目的是______，培養(yǎng)箱中充入5%的CO2氣體的主要作用是___________________________。

（3）過程B用HAT培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，目的是_________________。

（4）為了使人的全部染色體分別包含于各種不同的人鼠雜交細胞中，人鼠融合細胞應(yīng)在______（填“HAT”或“普通”）培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。為檢查雜種細胞中含有的人染色體數(shù)目和形態(tài)，最好選取______（時期）的雜種細胞進行觀察。

（5）若將某次實驗獲得的各種人鼠雜種細胞分別在HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)，一段時間后，發(fā)現(xiàn)在HAT培養(yǎng)基中只有A、B、C三種雜種細胞能夠生長，檢查雜種細胞中保留的人染色體情況如下表（表中“＋”表示有相應(yīng)染色體，“－”表示無相應(yīng)染色體）：

根據(jù)表中信息，可推測人細胞中胸苷激酶基因位于_________號染色體上。

Answer 1

【答案】細胞膜具有一定的流動性 用滅活的病毒處理 防止雜菌污染 維持培養(yǎng)液的PH 篩選出人鼠融合細胞（雜種細胞） 普通 有絲分裂中期 17

【解析】

1、動物細胞培養(yǎng)的條件：（1）無菌、無毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物。（2）營養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)。（3）溫度和PH：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4。（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細胞代謝必需的）和5%的CO2（維持培養(yǎng)液的PH）。
2、分析表格：A、B、C三種雜種細胞共有的染色體是17號染色體.

（1）動物細胞融合的原理是細胞膜具有一定的流動性。植物原生質(zhì)體融合的誘導(dǎo)方法有物理法和化學(xué)法，而誘導(dǎo)動物細胞融合的方法有物理法、化學(xué)法和生物法，因此與植物原生質(zhì)體融合過程相比，過程A特有的誘導(dǎo)方法是生物法，即用滅活的病毒處理。
（2）動物細胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素的目的是防止雜菌污染，培養(yǎng)箱中充入5%的CO2氣體的主要作用是維持培養(yǎng)液適宜的pH。
（3）“由于人突變細胞中含胸苷激酶（TK）而缺乏HGPRT酶，小鼠正常細胞中含HGPRT酶而缺乏TK，兩種細胞均不能在HAT培養(yǎng)基中生長，但可在普通培養(yǎng)基中生長”。故過程B用HAT培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，目的是篩選出人鼠融合細胞（雜種細胞）。
（4）突變細胞和正常細胞都不能在HAT培養(yǎng)基上生長，但都能在普通培養(yǎng)基上生長，因此為了使人的全部染色體分別包含于各種不同的人鼠雜交細胞中，人鼠融合細胞應(yīng)在普通培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。有絲分裂中期，細胞中染色體形態(tài)穩(wěn)定、數(shù)目清晰，是觀察染色體形態(tài)和數(shù)目的最佳時期。
（5）在HAT培養(yǎng)基中只有A、B、C三種雜種細胞能夠生長，而A、B、C三種雜種細胞共有的染色體是17號染色體，據(jù)此可推知人細胞中胸苷激酶基因位于17號染色體上。