Question

【題目】菊花是重要觀賞花卉，為增加菊花花色類型，某科研小組從植物A的基因文庫中選出花色基因C（圖1），并將其與質(zhì)粒（圖2）重組，再借助農(nóng)桿菌導入菊花中。請回答下列問題：

（1）利用PCR技術(shù)可獲贈花色基因C，擴增前需根據(jù)花色基因C的一段核苷酸序列合成_____________，便于擴增時熱穩(wěn)定DNA聚合酶延伸DNA子鏈。

（2）構(gòu)建基因表達載體時，需用EcoRⅠ分別處理C基因和質(zhì)粒而不用BamHⅠ的理由是_____________；當C基因和質(zhì)粒連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是_____________。

（3）用含C基因的農(nóng)桿菌侵染菊花愈傷組織時，需在培養(yǎng)基中添加酚類物質(zhì)，其目的是_____________；C基因的遺傳特性能在菊花體內(nèi)維持和表達的關(guān)鍵是_____________；為篩選出成功轉(zhuǎn)化的菊花細胞，應(yīng)在篩選培養(yǎng)基中添加_____________。

（4）經(jīng)檢測部分菊花植株的基因組中已有C基因，但沒有發(fā)現(xiàn)基因C對應(yīng)花色，為分析原因，可從分子水平上采用_____________技術(shù)檢測C基因是否轉(zhuǎn)錄。

Answer 1

【答案】 引物（一對引物） EcoRⅠ可切割C基因兩端和質(zhì)粒，產(chǎn)生相同黏性末端便于構(gòu)建重組質(zhì)粒，而C基因兩端無BamHⅠ的識別序列 磷酸二酯鍵 吸引農(nóng)桿菌移向菊花細胞，有利于C基因成功轉(zhuǎn)化 目的基因插入到了菊花細胞的染色體DNA上 潮霉素 分子雜交

【解析】試題分析：據(jù)圖分析，圖1中C基因（目的基因）兩側(cè)的限制酶是EcoRⅠ；圖2表示質(zhì)粒，含有標記基因、啟動子、終止子、EcoRⅠ和BamHⅠ限制酶切割位點。

（1）利用PCR技術(shù)擴增C基因（目的基因）時，首先要根據(jù)目的基因的核苷酸序列合成一對引物，便于擴增時熱穩(wěn)定DNA聚合酶延伸DNA子鏈。

（2）根據(jù)以上分析可知，EcoRⅠ可切割C基因兩端和質(zhì)粒，產(chǎn)生相同黏性末端便于構(gòu)建重組質(zhì)粒，而C基因兩端無BamHⅠ的識別序列，因此構(gòu)建基因表達載體時，需用EcoRⅠ分別處理C基因和質(zhì)粒而不用BamHⅠ。DNA連接酶連接目的基因和質(zhì)粒之間的粘性末端，形成的化學鍵是磷酸二酯鍵。

（3）用含C基因的農(nóng)桿菌侵染菊花愈傷組織時，需在培養(yǎng)基中添加酚類物質(zhì)，以吸引農(nóng)桿菌移向菊花細胞，有利于C基因成功轉(zhuǎn)化；C基因的遺傳特性能在菊花體內(nèi)維持和表達的關(guān)鍵是目的基因插入到了菊花細胞的染色體DNA上；圖示質(zhì)粒上的標記基因是潮霉素抗性基因，因此為篩選出成功轉(zhuǎn)化的菊花細胞，應(yīng)在篩選培養(yǎng)基中添加潮霉素。

（4）C基因表達的產(chǎn)物是mRNA，可以利用分子雜交法進行檢測。