探究如何從土壤中分離自生固氮菌與計(jì)數(shù)。
實(shí)驗(yàn)原理：農(nóng)田的表層土壤中，自生固氮菌的含量比較多。將用表層土壤制成的稀泥漿，接種到無(wú)氮培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。在這種情況下，只有自生固氮菌才能生長(zhǎng)繁殖。用這種方法，可以將自生固氮菌與其他細(xì)菌分離開(kāi)來(lái)。
材料用具：農(nóng)田的表層土壤、無(wú)氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、盛9mL無(wú)菌水的大試管若干。無(wú)菌移液管、無(wú)菌涂布器、無(wú)菌培養(yǎng)皿、盛90mL無(wú)菌水的錐形瓶、酒精燈、恒溫箱。
方法步驟：
(1)倒平板。分別將無(wú)氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基倒平板，應(yīng)在___________操作。
(2)制備土壤稀釋液。取土樣10g加入盛有90mL無(wú)菌水的錐形瓶中，充分搖勻。用無(wú)菌移液管吸取上清液1mL，轉(zhuǎn)至9mL無(wú)菌水的大試管中，依次稀釋到107倍稀釋度。為實(shí)現(xiàn)無(wú)菌操作，試管口和移液管應(yīng)在離火焰____cm處。
(3)涂布。按照由107~103稀釋度的順序分別吸取0.1mL進(jìn)行平板涂布，每個(gè)稀釋度下，無(wú)氮培養(yǎng)基應(yīng)至少涂布____個(gè)平板，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基涂布____個(gè)平板。
(4)培養(yǎng)。放入恒溫箱內(nèi)，在適宜溫度條件下培養(yǎng)3d～4d。一般每隔____小時(shí)統(tǒng)計(jì)一次，選取____時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止____。
(5)細(xì)菌的計(jì)數(shù)。當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)在___________的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。如果測(cè)試的平均值為50，則每克樣品中的菌落數(shù)是___________。(稀釋度是105)
(6)預(yù)期結(jié)果。相同稀釋度下，牛肉膏蛋白胨平板上的菌落數(shù)____(填“多于”或“少于”)無(wú)氮培養(yǎng)基上的數(shù)目。理由是______________。
