Question

【題目】研究表明，HER2/neu是一種原癌基因，它表達(dá)的H蛋白在多種惡性腫瘤特別是乳腺癌細(xì)胞中過量表達(dá)。抗H蛋白單克隆抗體能抑制過量表達(dá)H蛋白的乳腺癌細(xì)胞的生長，目前已成為有效的生物治療手段。

(1)H蛋白在成年個(gè)體的正常組織中表達(dá)量____(填“低”或“高”)。H蛋白是一個(gè)跨膜蛋白，結(jié)構(gòu)如圖所示。制備免疫小鼠用的H蛋白(抗原)時(shí)，應(yīng)構(gòu)建_______區(qū)基因，轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞表達(dá)并提純。

(2)為擴(kuò)增出大量目的基因需用到PCR技術(shù)。常規(guī)PCR技術(shù)一般包括變性、退火、延伸等步驟，退火(55~60℃)時(shí)_________________堿基互補(bǔ)配對。設(shè)計(jì)引物是PCR技術(shù)的關(guān)鍵之一，某同學(xué)設(shè)計(jì)的兩組引物如下表所示，其中引物對______(填“A”或“B”)設(shè)計(jì)不合理。

引物對A	P1 GTCCGCTAGTGGCTGTG P2 AGCTGGCGTTTAGCCTCG
引物對B	S1 AAGCCGGGCGCGCCCGGAA S2 TTCGGCCCGCGTTATGCGCG

(3)制備抗H蛋白單克隆抗體時(shí)，需將H蛋白注射到小鼠體內(nèi)，這樣做的目的是使小鼠體內(nèi)產(chǎn)生_________。

(4)治療乳腺癌時(shí)，可單獨(dú)使用抗H蛋白單克隆抗體，也可以將______結(jié)合制成“生物導(dǎo)彈”，殺死癌細(xì)胞。

Answer 1

【答案】低 胞外 引物與模板DNA單鏈 B 分泌抗H蛋白抗體的B淋巴細(xì)胞(或漿細(xì)胞) 抗H蛋白單克隆抗體與藥物(或細(xì)胞毒素)

【解析】

1、PCR擴(kuò)增過程：①目的基因DNA受熱（如95℃）變性后解鏈為單鏈；②溫度降低時(shí)（如55℃），引物與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合；③當(dāng)溫度回升時(shí)（如72℃），在DNA聚合酶作用下進(jìn)行延伸，形成互補(bǔ)的DNA雙鏈。

2、單克隆抗體的制備過程

（1）向小鼠體內(nèi)注射特定的抗原，使其發(fā)生免疫反應(yīng)，使B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。

（2）利用仙臺病毒或聚乙二醇等作介導(dǎo)，使B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合。

（3）經(jīng)過篩選獲得來自單一細(xì)胞的既能產(chǎn)生特異性抗體，又能無限增殖的雜交瘤細(xì)胞。

（4）將雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖，從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠的腹水中提取。

（1）由題意可知，H蛋白在多種惡性腫瘤細(xì)胞中過量表達(dá)，因此H蛋白在成年個(gè)體的正常組織中表達(dá)量低。H蛋白為跨膜蛋白，包括胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)，其中胞外區(qū)可被免疫系統(tǒng)識別，故制備免疫小鼠H蛋白時(shí)，應(yīng)構(gòu)建胞外區(qū)基因。

（2）常規(guī)PCR技術(shù)一般包括變性、退火、延伸等步驟，退火（55～60℃）時(shí)，引物和模板DNA單鏈堿基互補(bǔ)配對，以便DNA子鏈延伸。引物B的S1、S2存在大量可以互補(bǔ)配對的堿基對，可能會發(fā)生自身堿基互補(bǔ)配對或者S1和S2部分發(fā)生堿基互補(bǔ)配對，而失去與模板鏈結(jié)合的機(jī)會，因此其設(shè)計(jì)不合理。

（3）制備抗H蛋白單克隆抗體時(shí)，H蛋白為抗原，將H蛋白注射到小鼠體內(nèi)，會發(fā)生特異性免疫反應(yīng)，產(chǎn)生特異性的漿細(xì)胞，進(jìn)而產(chǎn)生抗H蛋白的抗體。

（4）治療乳腺癌時(shí)，可單獨(dú)使用抗H蛋白單克隆抗體，通過抗原抗體結(jié)合，最終清除癌細(xì)胞，也可以將抗H蛋白單克隆抗體和抗癌藥物結(jié)合制成“生物導(dǎo)彈”，雙重作用殺死癌細(xì)胞。