Question

基因克隆是對分離出來的目的基因進(jìn)行大量擴(kuò)增的過程。經(jīng)過基因克隆，可以生產(chǎn)出大量的目的基因或在基因表達(dá)時(shí)獲得大量的蛋白質(zhì)。細(xì)菌質(zhì)粒是基因克隆的合適載體，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，某些細(xì)菌質(zhì)粒中含有兩個(gè)抗生素抗性基因——氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因，而且，在四環(huán)素抗性基因中存在限制酶的單一識別序列。

下圖表示利用質(zhì)粒進(jìn)行基因克隆的過程，其中A-D表示物質(zhì)，I和II表示抗性基因，①—⑦表示過程，其它數(shù)字表示菌落，據(jù)圖回答下列問題：

（1）寫出下列字母和編號的名稱：A：         ； II：          。

（2）將A和B形成D所需的酶是        。⑤過程中為提高成功率，常用        溶液處理大腸桿菌。

（3）為篩選含有物質(zhì)A的細(xì)菌，需進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，先在培養(yǎng)基（一）中只加入氨芐青霉素，一段時(shí)間后，培養(yǎng)基上長出的細(xì)菌菌落具有        特性。然后，用滅菌絨布從培養(yǎng)基（一）中蘸取菌種，再按到只含四環(huán)素的培養(yǎng)基（二）中培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)基（一）和（二）上的細(xì)菌生長情況，可以判斷圖中菌落        （填數(shù)字）即為篩選出的含有物質(zhì)A的細(xì)菌，原因是                                        。

 

Answer 1

【答案】

（1） 目的基因      氨芐青霉素抗性基因 

（2） 限制酶和DNA連接酶    CaCl₂ 

（3）抗氨芐青霉素     3、5      由于目的基因破壞了四環(huán)素抗性基因，使受體細(xì)胞不能在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長，所以該菌落就是篩選的含有目的基因的菌落（2分）

【解析】（1）如圖A表示目的基因，由于在四環(huán)素抗性基因中存在限制酶的單一識別序列，所以II表示氨芐青霉素基因。

（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體所需的酶有限制酶和DNA連接酶。為了使目的基因?qū)�入大腸桿菌，常用CaCl₂處理大腸桿菌。

（3）能夠在氨芐青霉素的培養(yǎng)基中生長的細(xì)菌菌落能夠抗氨芐青霉素，由于四環(huán)素抗性基因被限制酶破壞，所以含有物質(zhì)A的細(xì)菌不能在四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長，即3和5。