Question

 某質(zhì)粒上有Sal I、HindIII、BamH I三種限制酶切割位點(diǎn)，同時還含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因。利用此質(zhì)粒獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的過程如圖所示，請回答下列問題．

  (1)將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒分別用Sal I酶切，酶切產(chǎn)物用             催化連接后，兩個DNA片段的連接結(jié)果有              種。

  (2)在構(gòu)建重組質(zhì)粒時，應(yīng)選用            兩種酶對            進(jìn)行切割，

    以保證重組DNA序列的唯一性。

  (3)為篩選出導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，應(yīng)在培養(yǎng)基中加入                     ，理由是                                                                  。

  (4)將轉(zhuǎn)人抗鹽基因的煙草細(xì)胞培育成完整的植株需要用                    技術(shù)，愈

    傷組織經(jīng)                   進(jìn)而形成完整植株，此過程除營養(yǎng)物質(zhì)外還必須向培

養(yǎng)基中添加               。

Answer 1

（1）DNA連接酶      3   （2）Sal I、HindIII  分質(zhì)粒和含抗鹽基因的DNA

   （3）氨芐青霉素    重組質(zhì)粒中含抗氨芐青霉基因而抗四環(huán)素基因被破壞

   （4）植物組織培養(yǎng)     細(xì)胞培殖和分化

植物激素（生長調(diào)節(jié)劑、生長素和細(xì)胞分裂素）

解析:

本題考查基因工程操作步驟，屬于考綱理解應(yīng)用層次。⑴將DNA片段連接起來用的是DNA連接酶，兩個DNA片段的連接存在質(zhì)粒與質(zhì)粒連接、質(zhì)粒與目的基因連接、目的基因與目的基因連接3種連接方式。⑵根據(jù)目的基因與質(zhì)粒上含有的限制酶切割位點(diǎn)的特點(diǎn)可知，為了避免出現(xiàn)3種組合，可以選用Sal I、HindIII限制酶分別切割質(zhì)粒和目的基因。⑶這樣得到的重組質(zhì)粒中標(biāo)記基因只剩下了抗氨芐青霉素基因，這樣在培養(yǎng)中添加氨芐青霉素就可以篩選出含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌。⑷要將單個的細(xì)胞培育成完整的植株需要利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，愈傷組織通過細(xì)胞分化和細(xì)胞增殖發(fā)育成完整植株。