Question

下圖(一)為某基因工程中利用的質(zhì)粒筒圖，小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位點(diǎn)，amp^R為青霉素(抗生素)抗性基因，tct^R為四環(huán)素(抗生素)抗性基因，P為啟動(dòng)因子，T為終止子，ori為復(fù)制原點(diǎn)。已知目的基因的兩端分別有包括EcoRⅠ、BamHⅠ在內(nèi)的多種酶的酶切位點(diǎn)。下圖(二)為幾種酶作用于基因的位置。請(qǐng)回答下列問題：

(1)在基因工程中常用的工具有三種：一是用作切取目的基因的_________酶；二是將目的基因與運(yùn)載體拼接的_________酶；三是作為運(yùn)載體的質(zhì)粒。
(2)將含有目的基因的DNA與經(jīng)特定的酶切后的動(dòng)載體(質(zhì)粒)進(jìn)行拼接形成重組DNA，理論上講，重組DNA可能有“____________”、“____________”、“___________”三種，其中有效的(所需要的)基因表達(dá)載體是____________，因此需要對(duì)這些拼接產(chǎn)物進(jìn)行分離提純。
(3)利用圖(一)所示的質(zhì)粒拼接形成的3種拼接產(chǎn)物(基因表達(dá)載體)與無(wú)任何抗藥性的原核宿主細(xì)胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能生長(zhǎng)的原核宿主細(xì)胞所含有的拼接產(chǎn)物(基因表達(dá)載體)是_______。
(4)有效的基因表達(dá)載體成功導(dǎo)入受體細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)時(shí)，首先需要進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)是圖(一)中的________。在動(dòng)物基因工程中，將基因表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞的常用方法是________。在植物基因工程中，將基因表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞的常用方法是_________。是因?yàn)檫@種微生物很容易侵染到_________中，從而把它的Ti質(zhì)粒上的_________轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞染色體的DNA上。
(5)在基因工程中，作用于圖(二)所示a位置的酶是____________；作用于b位置的酶是____________。

Answer 1

(1)限制(限制性核酸內(nèi)切酶)      DNA連接
(2)目的―目的基因  目的基因―運(yùn)載體   運(yùn)載體―運(yùn)載體   目的基因―動(dòng)載體
(3)運(yùn)載體―運(yùn)載體和目的基因―運(yùn)載體
(4)P(啟動(dòng)子)      顯微注射法    農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法    雙子葉植物和裸子植物      T-DNA
(5)限制酶(限制性內(nèi)切酶)       DNA解旋酶