【題目】蘋果干腐病是由一種名為茶藤子葡萄座腔菌的真菌引起的疾病,病菌通常由枝條傷口入侵感染,在傷口處形成潰瘍。某中學(xué)的科研小組計劃分離出該真菌,并進行藥物防治實驗,為蘋果干腐病的防治提供合理的建議。經(jīng)過查閱資料,確定了分離時所用的PDA培養(yǎng)基配方,如下表所示:

該真菌在上述PDA培養(yǎng)基上生長時有特定的形態(tài)特征:輻射狀白色匍匐菌絲,絨毛狀。

(1)要獲得菌落,則上表中還應(yīng)添加的成分是________。氯霉素在PDA培養(yǎng)基中的作用是____。培養(yǎng)基的制備步驟包括計算、稱量、溶化、_____________、倒平板。等平板冷卻凝固后,應(yīng)將平板倒置,這樣做的目的是_________。

(2)用剪刀從染病枝條潰瘍處剪取lxlcm2的患病組織,并用0.1%的升汞進行____,置于培養(yǎng)基中心,在合適條件下進行培養(yǎng),共培養(yǎng)五組。待菌落形態(tài)特征穩(wěn)定后,用_____法將該致病菌分別轉(zhuǎn)移至含有等量0.5%苦水堿劑、40%福美砷、清水的上述PDA培養(yǎng)基中進行抗藥性實驗,并每隔24h記錄一次最后劃線區(qū)域的菌落數(shù)目。

①選取菌落數(shù)目穩(wěn)定的記錄作為結(jié)果,這樣做的目的是____。

②記錄結(jié)果如下:

從結(jié)果分析可知,_______ 能很好地抑制該真菌的生長,適合防治蘋果干腐病。

【答案】瓊脂(或凝固劑) 抑制細菌等雜菌的生長 滅菌 以防止冷凝水污染培養(yǎng)基 消毒 平板劃線 可以防止因培養(yǎng)時間不足而導(dǎo)致遺漏菌落數(shù)目 0.5%苦水堿劑

【解析】

培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基一般含有水、碳源、氮源、無機鹽等營養(yǎng)要素,此外培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。根據(jù)物理狀態(tài)培養(yǎng)基可分為固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基,一般固體培養(yǎng)基中會加入瓊脂作為凝固劑。

1)培養(yǎng)菌落需要用固體培養(yǎng)基,而固體培養(yǎng)基需要加入瓊脂(或凝固劑)進行凝固。分析表格物質(zhì),氯霉素能夠抑制細菌等雜菌的生長,而真菌可以生存。培養(yǎng)基的制備步驟包括計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。等平板冷卻凝固后,要將平板倒置放置,以防止冷凝水污染培養(yǎng)基。
2)0.1%的升汞的作用是消毒,題中給出“每隔24h記錄一次最后劃線區(qū)域的菌落數(shù)目”,因此可以確定分離微生物用的方法是平板劃線法。
①為了避免因培養(yǎng)時間不足而導(dǎo)致遺漏的菌落數(shù)目,因此要選取菌落數(shù)目穩(wěn)定的記錄作為結(jié)果。
②通過表格數(shù)據(jù)可知,不同條件下菌落數(shù)相比較,0.5%苦水堿劑作用后菌落數(shù)最少,因此0.5%苦水堿劑能很好的抑制該真菌的生長,適合防治蘋果干腐。

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A. 根據(jù)圖1的微生物接種方法,可得到圖2所示的四種菌落分布圖

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A.B.

C.D.

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請回答:

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(2)鎘導(dǎo)致葉綠素含量下降的另一個原因是根系對Mg2+的吸收能力下降,葉綠素合成減少。利用下列材料和試劑設(shè)計實驗,驗證鎘會降低根系對Mg2+的吸收能力。請寫出實驗思路。(要求:不破壞植物組織)

材料和試劑:CdCl2、完全培養(yǎng)液黑麥草,其它所需的材料和設(shè)備。

(3)結(jié)合圖中數(shù)據(jù),分析鎘降低根系對Mg2+吸收能力的機理:

___________,導(dǎo)致細胞能量供應(yīng)減少

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(1)1表示獲取人α1抗胰蛋白酶基因的兩種方法,請回答下列問題:

a過程是在________酶的作用下完成的,該酶的作用特點是__________________________。

c過程稱為_____________,該過程需要的原料是____________________。

③要確定獲得的基因是否是所需的目的基因,可以從分子水平上利用________________技術(shù)檢測該基因的堿基序列。

(2)利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將控制該酶合成的基因?qū)胙虻氖芫眩罱K培育出能在乳腺細胞表達人α1抗胰蛋白酶的轉(zhuǎn)基因羊,從而更易獲得這種酶,簡要過程如圖2所示。

①獲得目的基因后,常利用________技術(shù)在體外將其大量擴增。

②載體上綠色熒光蛋白(GEP)基因的作用是便于_____________________________;虮磉_載體d,除圖中的標示部分外,還必須含有__________________。

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