Question

（10分）科學(xué)家將魚抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相對寒冷的環(huán)境中生長。質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四種限制酶切割位點，下圖是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程的示意圖（ampr為抗氨芐青霉素基因），其中①～④是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程中的相關(guān)步驟，Ⅰ、Ⅱ表示相關(guān)結(jié)構(gòu)或細胞。請據(jù)圖作答：

（1）在構(gòu)建基因表達載體時，可用一種或者多種限制酶進行切割。為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實例中，應(yīng)該選用限制酶___________和限制酶___________分別對___________（2分）和質(zhì)粒進行切割。

（2）培養(yǎng)基中的氨芐青霉素會抑制番茄愈傷組織細胞的生長，要利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入含魚的抗凍蛋白基因的番茄細胞，應(yīng)使基因表達載體Ⅰ中含有______作為標(biāo)記基因。

（3）研究人員通常采用___________法將魚抗凍蛋白基因?qū)�入番茄細胞�?nèi)。在分子水平檢測目的基因是否翻譯形成了相應(yīng)的蛋白質(zhì)通常采用___________（2分）技術(shù)。

（4）利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入含魚的抗凍蛋白基因的番茄組織細胞培育成植株。圖中③、④依次表示組織培養(yǎng)過程中番茄組織細胞的___________和___________過程。

 

Answer 1

【答案】

（1）PstⅠ   SmaⅠ　含魚抗凍蛋白基因的DNA（2分，只答魚的抗凍蛋白基因不給分） （2）抗氨芐青霉素基因（ampr）�。�3）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化（或基因槍法、花粉管通道法等）　抗原—抗體雜交（2分）�。�4）脫分化   再分化

【解析】（1）為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，應(yīng)選用雙酶切，即選擇PstⅠ和SmaⅠ切割。

（2）ampr為抗氨芐青霉素基因，屬于標(biāo)記基因。

（3）將目的基因?qū)�入植物細胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。檢測目的基因是否翻譯形成蛋白質(zhì)常用抗原－抗體雜交法。

（4）植物組織培養(yǎng)包括脫分化和再分化過程。