Question

【題目】腸出血性大腸桿菌是能導(dǎo)致人體患病的為數(shù)不多的幾種大腸桿菌中的一種，人體感染該種大腸桿菌后的主要癥狀是出血性腹瀉，感染嚴(yán)重者可出現(xiàn)溶血性尿毒綜合征（HUS），危及生命。該大腸桿菌在血平板（培養(yǎng)基中添加適量血液）上生長(zhǎng)時(shí)，可破壞菌落周?chē)�的紅細(xì)胞，使其褪色，從而形成透明圈。下圖為從被腸出血性大腸桿菌污染的食物中分離和提純?cè)摯竽c桿菌的操作流程示意圖。請(qǐng)回答下列相關(guān)問(wèn)題：

（1）肉湯培養(yǎng)基可為培養(yǎng)的微生物提供的營(yíng)養(yǎng)成分包括________________________。

（2）以上操作中在血平板上的接種方法是________________；第一次接種操作前和整個(gè)接種操作結(jié)束后均需要對(duì)接種工具進(jìn)行灼燒滅菌，其目的分別是________和________。

（3）為了進(jìn)一步研究該大腸桿菌的抗原性，常利用________法分離其蛋白質(zhì)，若甲蛋白質(zhì)比乙蛋白質(zhì)后洗脫出來(lái)，則相對(duì)分子質(zhì)量較大的是________。在裝填凝膠柱時(shí)，不得有氣泡產(chǎn)生，是因?yàn)?/span>________________。

Answer 1

【答案】碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽等 平板劃線法 殺死接種環(huán)上的微生物，避免污染培養(yǎng)基（滅菌） 避免污染環(huán)境和感染操作者 凝膠色譜 乙蛋白質(zhì) 氣泡會(huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫順序降低分離效果

【解析】

凝膠色譜法（分配色譜法）：①原理：分子量大的分子通過(guò)多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動(dòng)快；分子量小的分子穿過(guò)多孔凝膠顆粒內(nèi)部，路程長(zhǎng)，流動(dòng)慢。②凝膠材料：多孔性，多糖類(lèi)化合物，如葡聚糖、瓊脂糖。③分離過(guò)程：混合物上柱→洗脫→大分子流動(dòng)快、小分子流動(dòng)慢→收集大分子→收集小分子，洗脫：從色譜柱上端不斷注入緩沖液，促使蛋白質(zhì)分子的差速流動(dòng)。④作用： 分離蛋白質(zhì)，測(cè)定生物大分子分子量，蛋白質(zhì)的脫鹽等。

（1）肉湯培養(yǎng)基是天然培養(yǎng)基，可為培養(yǎng)的微生物提供的營(yíng)養(yǎng)成分包括碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽等。

（2）圖示中用到了接種環(huán)從液體培養(yǎng)基中接種到固體培養(yǎng)基中，因此在血平板上的接種方法是平板劃線法。第一次接種操作前對(duì)接種工具進(jìn)行灼燒滅菌，其目的是殺死接種環(huán)上的微生物，避免污染培養(yǎng)基（滅菌），整個(gè)接種操作結(jié)束后對(duì)接種工具進(jìn)行灼燒滅菌，其目的是避免污染環(huán)境和感染操作者。

（3）為了進(jìn)一步研究該大腸桿菌的抗原性，常利用凝膠色譜法分離其蛋白質(zhì)。分子量大的分子通過(guò)多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動(dòng)快，若甲蛋白質(zhì)比乙蛋白質(zhì)后洗脫出來(lái)，則相對(duì)分子質(zhì)量較大的是乙蛋白質(zhì)。在裝填凝膠柱時(shí)有氣泡產(chǎn)生，就會(huì)在色譜柱內(nèi)形成無(wú)效的空隙，使本該進(jìn)入凝膠內(nèi)部的樣品分子從這些空隙中通過(guò)，攪亂洗脫液的流動(dòng)次序，影響分離的效果。