Question

（6分）大腸桿菌pUC118質(zhì)粒的某限制酶唯一酶切序列，位于該質(zhì)粒的lacZ基因中，lacZ基因中如果沒有插入外源基因，lacZ基因便可表達(dá)出b-半乳糖苷酶，當(dāng)培養(yǎng)基中含有IPTG和X-gal時(shí)，X-gal便會(huì)被b-半乳糖苷酶水解成藍(lán)色，大腸桿菌將形成藍(lán)色菌落；如果lacZ基因中插入了外源基因，帶有pUC118質(zhì)粒的大腸桿菌便不能表達(dá)b-半乳糖苷酶，培養(yǎng)基中的X-gal不會(huì)被水解成藍(lán)色，大腸桿菌將形成白色菌落。pUC118還攜帶了氨芐青霉素抗性基因。右圖是利用lacZ基因的插入失活篩選重組質(zhì)粒示意圖。據(jù)圖回答下列問題：

（1）作為受體大腸桿菌應(yīng)______________________，以方便篩選已導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體大腸桿菌。取用氯化鈣溶液處理（目的是                        ）過的受體大腸桿菌，置于試管Ⅱ中，并加入                      。

（2）圖中的培養(yǎng)基中除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機(jī)鹽、水、生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)外，還應(yīng)加入___________等物質(zhì)，用以篩選導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的受體大腸桿菌。

（3）將上述處理后的大腸桿菌置于圖中選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，以檢測受體大腸桿菌是否導(dǎo)

入重組質(zhì)粒，請預(yù)測菌落的顏色，并分析結(jié)果：

①                                                                         。

②                                                                         。

 

Answer 1

【答案】

（12分）（1）不含氨芐青霉素抗性基因（或?qū)Π逼S青霉素敏感） 增加細(xì)胞壁的通透性  在試管Ⅰ中制備好的DNA

（2）IPTG、X-gal、氨芐青霉素

（3）①若長出藍(lán)色菌落，說明 自連的運(yùn)載體pUC118質(zhì)粒已轉(zhuǎn)入受體菌，但目的基因沒有轉(zhuǎn)入運(yùn)載體（或說明重組質(zhì)粒沒有導(dǎo)入受體大腸桿菌）

②若長出白色菌落，說明重組質(zhì)粒已導(dǎo)入受體大腸桿菌

【解析】PUC118質(zhì)粒攜帶了氨芐青霉素抗性基因 ，受體大腸桿菌應(yīng)不含氨芐青霉素抗性基因，才能才能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上篩選出導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體大腸桿菌。用氯化鈣溶液處理增加其細(xì)胞壁的通透性過的受體大腸桿菌呈感受態(tài)，能吸收試管中的DNA，篩選導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的受體大腸桿菌，質(zhì)粒lacZ基因中插入了外源基因，帶有PUC118質(zhì)粒的大腸桿菌便不能表達(dá)β—半乳糖苷酶，培養(yǎng)基中的X—gal不會(huì)被水解成藍(lán)色，大腸桿菌將形成白色菌落，因此選擇培養(yǎng)基中還應(yīng)加入IPTG、X—gal，如果長出藍(lán)色菌落，說明自連的運(yùn)載體PUC118質(zhì)粒已轉(zhuǎn)入受體菌，但目的基因沒有接入運(yùn)載體或說明重組質(zhì)粒沒導(dǎo)入受體大腸桿菌；如果長出白色菌落，說明重組質(zhì)料已導(dǎo)入受體大腸桿菌。