Question

【題目】CAR--T細(xì)胞療法是通過(guò)設(shè)計(jì)CAR基因，并導(dǎo)人癌癥患者的T細(xì)胞中，使其轉(zhuǎn)化為CAR-T細(xì)胞，CAR--T細(xì)胞膜上的CAR蛋白與癌細(xì)胞表面抗原特異結(jié)合后，激活CAR-T細(xì)胞使其增殖、分化，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)癌細(xì)胞的特異性殺傷和記憶。主要過(guò)程如下圖。請(qǐng)回答：

（1）要獲取CAR基因，可采取PCR技術(shù)進(jìn)行大量擴(kuò)增，前提是_________________________。

（2）將CAR基因?qū)�人患�?/span>T細(xì)胞前，需完成過(guò)程[①]___________________該過(guò)程中先要用___________切割含有CAR基因的DNA片段和_______， 以形成相同的黏性末端，再用DNA連接酶連接形成pCDH-CAR， pCDH- -CAR上除了目的基因外，還有一些必須的部分，比如_________________，它是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位。

（3）完成過(guò)程②常用方法是____________法。此外，還可以先將CAR基因整合到逆轉(zhuǎn)錄病毒載體中，再利用病毒的________________性導(dǎo)人并將CAR基因整合到T細(xì)胞的_________________上。

（4）檢測(cè)CAR- T 細(xì)胞中的CAR基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA所采用的方法是_________________________。

（5）在將CAR--T細(xì)胞輸給病人進(jìn)行治療之前，還需在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)。體外培養(yǎng)CAR-T細(xì)胞的培養(yǎng)液中除合成培養(yǎng)基的成分外，一般還需添加_____________________________________等天然成分。

Answer 1

【答案】CAR基因序列已知 構(gòu)建基因表達(dá)載體 限制性核酸內(nèi)切酶 pCDH質(zhì)粒 啟動(dòng)子 顯微注射 侵染 染色體DNA 分子雜交技術(shù) 血清（血漿）

【解析】

根據(jù)題意可得，CAR-T細(xì)胞療法實(shí)際為通過(guò)基因工程改變患者T細(xì)胞的基因，使其能夠產(chǎn)生CAR蛋白以特異性殺傷癌細(xì)胞。過(guò)程①表示獲得重組DNA分子，過(guò)程②表示將重組DNA分子轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞；過(guò)程③表示對(duì)癌細(xì)胞的特異性殺傷和記憶。

（1）利用PCR技術(shù)對(duì)CAR基因進(jìn)行大量擴(kuò)增的前提是CAR基因序列已知；

（2）CAR基因?yàn)槟康幕�因，在將該基因�(qū)�人患�?/span>T細(xì)胞前，需完成基因表達(dá)載體，即過(guò)程①；該過(guò)程需要用同種限制酶（限制性核酸內(nèi)切酶）切割目的基因和運(yùn)載體（pCDH質(zhì)粒），以形成相同的黏性末端；基因表達(dá)載體上RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位是啟動(dòng)子；

（3）過(guò)程②表示將重組DNA分子轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞，動(dòng)物細(xì)胞常用方法為顯微注射法；病毒為寄生生物，故可以利用病毒的侵染特性導(dǎo)入并將CAR基因整合到T細(xì)胞的染色體DNA上；

（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定的第二步是檢測(cè)目的基因（CAR）基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，方法是分子雜交技術(shù)；

（5）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)常加入血清（血漿）等天然成分。