Question

【題目】尿素［CO(NH2)2］是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。但尿素并不能直接被農(nóng)作物吸收，只有當(dāng)土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后，才能被植物利用。某生物兵趣小組欲分離土壤中分解尿素的細(xì)菌，

設(shè)計(jì)了如下實(shí)驗(yàn)流程：

土壤取樣→選擇培養(yǎng)→梯度稀釋→涂布培養(yǎng)→計(jì)數(shù)與鑒定

請(qǐng)回答相關(guān)問(wèn)題：

（1）涂布培養(yǎng)前需要梯度稀釋?zhuān)�其目的�?/span>____，如果得到了2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在____之間的平板，則說(shuō)明稀釋操作比較成功。

（2）選擇培養(yǎng)過(guò)程能夠“濃縮”尿素分解菌是因?yàn)槠渑囵B(yǎng)基____

（3）取1g土壤，按下圖稀釋后，在三個(gè)平板上分別接入0.1ml稀釋液后，經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別是52, 50和48。據(jù)此可計(jì)算出每克土樣中的活菌數(shù)為___，該數(shù)值與活菌的實(shí)際數(shù)目相比____（偏高／偏低），原因是：____

（4）在培養(yǎng)基上滴加酚紅指示劑可以鑒定其上細(xì)菌能否分解尿素，其原理是____

Answer 1

【答案】將聚在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而在培養(yǎng)基上形成單個(gè)菌落（或培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌） 30—300 以尿素作為唯一氮源 5.0107個(gè) 偏低 因?yàn)閮蓚�(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落 分解尿素的細(xì)菌能(合成脲酶)將尿素分解成氨，使培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)，酚酞指示劑變紅

【解析】

統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法
（1）顯微鏡直接計(jì)數(shù)法
①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)； ③缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。
（2）間接計(jì)數(shù)法（活菌計(jì)數(shù)法）
①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。
②操作
a、設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。
b、為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。
③計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)。

（1）涂布培養(yǎng)前需要梯度稀釋?zhuān)�其目的是將聚在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而在培養(yǎng)基上形成單個(gè)菌落；如果得到了2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30-300之間的平板，則說(shuō)明稀釋操作比較成功。
（2）選擇培養(yǎng)過(guò)程能夠“濃縮”尿素分解菌是因?yàn)槠渑囵B(yǎng)基以尿素作為唯一氮源，只有能夠分解尿素的微生物可以在此培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，而其它不能以尿素作為氮源的則會(huì)因?yàn)槿鄙俚�源而不能生長(zhǎng)。
（3）取1g土壤，按如圖稀釋后，在三個(gè)平板上分別接入0.1ml稀釋液后，經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別是52，50和48。據(jù)此可計(jì)算出每克土樣中的活菌數(shù)為×100=5.0×107個(gè)；由于兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，因此該數(shù)值與活菌的實(shí)際數(shù)目相比偏低。
（4）鑒定尿素分解菌的原理是分解尿素的細(xì)菌能合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，使培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)，酚酞指示劑變紅。