Question

【題目】培育具有抗除草劑性狀的植物A的實(shí)驗(yàn)流程如下圖所示。報告基因可以使細(xì)胞在特定情況下表達(dá)產(chǎn)物，易于檢測、且不影響實(shí)驗(yàn)材料產(chǎn)生新的性狀，質(zhì)粒上的報告基因的產(chǎn)物能催化無色物質(zhì)B呈現(xiàn)藍(lán)色。請回答下列問題：

（1）常用___________處理農(nóng)桿菌，促進(jìn)重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)。在篩選過程1中，用含有____________的培養(yǎng)基篩選成功導(dǎo)入重組表達(dá)載體的農(nóng)桿菌。

（2）通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，______________基因會隨T-DNA轉(zhuǎn)移到植物A的染色體DNA上。

（3）為選出細(xì)胞內(nèi)含轉(zhuǎn)化后的農(nóng)桿菌的愈傷組織，在篩選過程2中，還需要用______________________處理愈傷組織，挑選___________的愈傷組織繼續(xù)培養(yǎng)成植株。

（4）對轉(zhuǎn)基因植物A進(jìn)行個體生物學(xué)水平鑒定的方法是__________________________________。

Answer 1

【答案】Ca2+（CaCl2） 氨芐青霉素 除草劑抗性基因和報告 無色物質(zhì)B 呈現(xiàn)藍(lán)色 噴灑一定量或適量的除草劑，觀察植株是否存活

【解析】

圖中構(gòu)建的基因表達(dá)載體在篩選1時需要在培養(yǎng)基中加入氨芐青霉素以篩選成功導(dǎo)入表達(dá)載體的農(nóng)桿菌；利用農(nóng)桿菌感染法將表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞，由于“報告基因”編碼的蛋白質(zhì)能催化無色物質(zhì)B呈現(xiàn)藍(lán)色，所以圖中篩選2時需要用無色物質(zhì)B處理愈傷組織，以篩選出呈現(xiàn)藍(lán)色的組織。

（1）為提高表達(dá)載體進(jìn)入農(nóng)桿菌的效率需要用Ca2+處理細(xì)胞，使之成為感受態(tài)的細(xì)胞，易于吸收重組質(zhì)粒。氨芐青霉素抗性基因作為標(biāo)記基因，鑒別并篩選含有目的基因的細(xì)胞，含氨芐青霉素的培養(yǎng)基能將成功導(dǎo)入表達(dá)載體的農(nóng)桿菌篩選出來，所以，在篩選過程1中，用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選成功導(dǎo)入重組表達(dá)載體的農(nóng)桿菌。

（2）由圖所示，報告基因和目的基因即除草劑抗性基因位于基因表達(dá)載體質(zhì)粒的T—DNA上，所以，通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，除草劑抗性基因和報告基因會隨T-DNA轉(zhuǎn)移到植物A的染色體DNA上。

（3）根據(jù)題意可知，報告基因的產(chǎn)物能催化無色物質(zhì)B呈現(xiàn)藍(lán)色，因此篩選2需要用無色物質(zhì)B處理愈傷組織并篩選出呈現(xiàn)藍(lán)色的組織。

（4）對于轉(zhuǎn)基因植物A，如果目的基因成功表達(dá)則其具有抗除草劑特性，因此，對轉(zhuǎn)基因植物A進(jìn)行個體生物學(xué)水平鑒定的方法是噴灑一定量或適量的除草劑，觀察植株是否存活。