Question

【題目】與抗生素相比，抗菌肽具有抑菌范圍廣且不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)勢(shì)，廣泛用于養(yǎng)殖業(yè)。

將若干分子的石蛙抗菌肽（SPC）編碼序列按照首尾相連的方式插在質(zhì)粒pCLY10的卡那霉素抗性基因內(nèi)部，形成長(zhǎng)度為5200 bp的重組質(zhì)粒pCLY10-nSPC（圖15）。若pCLY10-nSPC經(jīng)限制酶AccIII處理后產(chǎn)生75 bp和4600 bp兩種長(zhǎng)度的DNA片段，則單個(gè)SPC由_____________個(gè)氨基酸構(gòu)成；每個(gè)重組質(zhì)粒含有_____________個(gè)SPC編碼序列。

（1）根據(jù)題干信息判斷，用于導(dǎo)入pCLY10-nSPC的受體細(xì)胞類型應(yīng)為_____________。

A. 抗菌肽敏感、卡那霉素抗性

B. 抗菌肽抗性、卡那霉素抗性

C. 抗菌肽敏感、卡那霉素敏感

D. 抗菌肽抗性、卡那霉素敏感

（2）若選定的受體細(xì)胞因缺乏trpA基因不能利用無(wú)機(jī)氮源合成色氨酸，則應(yīng)采用兩步法篩選含重組質(zhì)粒的細(xì)胞，其中用于第一步篩選的固體培養(yǎng)基配方應(yīng)為_____________。

A. 葡萄糖、硫酸銨、生長(zhǎng)因子

B. 牛肉膏、酵母粉、NH4Cl、卡那霉素

C. 蛋白胨（包括所有氨基酸）、酵母粉、牛肉膏

D. 葡萄糖、蛋白胨（包括所有氨基酸）、生長(zhǎng)因子、卡那霉素

（3）在測(cè)試表達(dá)產(chǎn)物SPC對(duì)枯草芽孢桿菌的殺菌功效時(shí)獲得了如圖所示的結(jié)果，下列表述中最能解釋這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果的是_____________和_____________。

A. SPC的濃度與抑菌效果有顯著相關(guān)性

B. 圓紙片的直徑與清晰區(qū)的大小呈正相關(guān)

C. 培養(yǎng)基中瓊脂的含量影響清晰區(qū)的大小

D. SPC對(duì)枯草芽孢桿菌的年齡具有不同的效應(yīng)

Answer 1

【答案】25 9 D A A D

【解析】

基因工程的操作步驟：獲取目的基因（基因文庫(kù)、PCR、人工合成）；構(gòu)建基因表達(dá)載體（含標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子、目的基因、復(fù)制原點(diǎn)等）；把目的基因?qū)�入受體細(xì)胞（顯微注射法、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、花粉管通道法、鈣離子處理法）；目的基因的檢測(cè)和鑒定（分子水平和個(gè)體水平檢測(cè)，前者包括DNA分子雜交、分子雜交和抗原抗體雜交；后者如抗蟲(chóng)抗病接種實(shí)驗(yàn)）。

由題意可知，該重組質(zhì)粒pCLY10-nSPC長(zhǎng)度為5200 bp，每個(gè)SPC編碼序列內(nèi)部均有1個(gè)AccIII酶切位點(diǎn)，若pCLY10-nSPC經(jīng)限制酶AccIII處理后產(chǎn)生75 bp和4600 bp兩種長(zhǎng)度的DNA片段，說(shuō)明單個(gè)SPC編碼序列長(zhǎng)度為75bp，SPC中含有的氨基酸的數(shù)目為：75÷3=25個(gè)；長(zhǎng)度為75bp的序列數(shù)目為：（5200-4600）÷75=8，又因?yàn)?/span>AccIII的酶切位點(diǎn)位于SPC編碼序列內(nèi)部，故4600 bp長(zhǎng)度的DNA片段中仍含有1個(gè)SPC編碼序列，故該重組質(zhì)粒含有的SPC編碼序列的數(shù)目為8+1=9個(gè)。

（1）由圖可知，構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，目的基因插入會(huì)破壞卡那霉素抗性基因，故受體細(xì)胞中也不能含有卡那霉素抗性基因，即對(duì)卡那霉素應(yīng)該是敏感的；又因?yàn)橹亟M質(zhì)粒中含有抗菌肽基因，可以表達(dá)抗菌肽，故受體細(xì)胞應(yīng)該對(duì)抗菌肽具有抗性。故選D。

（2）若選定的受體細(xì)胞因缺乏trpA基因不能利用無(wú)機(jī)氮源合成色氨酸，而重組質(zhì)粒含有trpA基因，只有含有重組質(zhì)粒或質(zhì)粒的受體細(xì)胞才能在不含有機(jī)氮源的培養(yǎng)基上存活，故首先可以選擇不含有機(jī)氮源的培養(yǎng)基進(jìn)行初步篩選。

A、葡萄糖、硫酸銨、生長(zhǎng)因子不含有機(jī)氮源，A正確；

B、牛肉膏可以提供有機(jī)氮源，B錯(cuò)誤；

C、蛋白胨、牛肉膏均可以提供有機(jī)氮源，C錯(cuò)誤；

D、蛋白胨可以提供有機(jī)氮源，D錯(cuò)誤。

故選A。

（3）由圖可知，在測(cè)試表達(dá)產(chǎn)物SPC對(duì)枯草芽孢桿菌的殺菌功效時(shí)，浸有不同濃度SPC的圓紙片產(chǎn)生的透明圈大小不同，說(shuō)明SPC的濃度與抑菌效果有顯著相關(guān)性；另外隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，透明圈逐漸變小，SPC對(duì)枯草芽孢桿菌的年齡具有不同的效應(yīng)。故選AD。