Question

【題目】某研究性學(xué)習(xí)小組了解到泡菜中的乳酸菌除了在發(fā)酵中產(chǎn)生乳酸，還可以降解亞硝酸鹽，該小組利用泡菜液進行了相關(guān)的研究。請回答下列問題：

（1）測定泡菜中亞硝酸鹽的含量可以用_________法。

（2）小組成員用改良的MRS固體培養(yǎng)基分離乳酸菌，該培養(yǎng)基成分如下：

蛋白胨	牛肉膏	酵母膏	葡萄糖	CaCO3	瓊脂	蒸餾水	其他成分略
10g	10g	10g	20g	20g	20g	1000ml

①該培養(yǎng)基因含碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣，從而在菌落周圍形成溶鈣圈，該培養(yǎng)基屬于__________（填“選擇”成“鑒別”）培養(yǎng)基。

②小組成員將泡菜液進行梯度稀釋后，取0．1ml加入到50℃左右的培養(yǎng)基中搖勻，待凝固后，再在其上加蓋一層透明的固體培養(yǎng)基。在50℃左右操作的原因是_____________________，加蓋一層透明的固體培養(yǎng)基的目的是______________________________。

③在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h后，挑取溶鈣圈較大的菌落，用平板劃線法進行進一步純化。若下圖甲是接種培養(yǎng)后的菌落分布圖，對應(yīng)的平板劃線操作示意圖為___________圖。

④乳酸菌在-20℃的冷凍箱中長期保存時，需要加入一定量的__________________。

Answer 1

【答案】比色 鑒別 此時培養(yǎng)基為液態(tài)且不燙手 隔絕空氣（氧氣），確保無氧環(huán)境 丙 甘油

【解析】

1、培養(yǎng)基按功能分：

種類	制備方法	特征	用途
選擇培養(yǎng)基	培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)成分	根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選率	加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌
鑒別培養(yǎng)基	加入某種試劑或化學(xué)藥品	依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學(xué)藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化而設(shè)計	鑒別和區(qū)分菌落相似的微生物伊紅和美藍培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌

2、運用平板劃線法接種微生物時，在進行第二次以及其后的劃線操作時'要從上一次劃線的末端開始劃線。每次劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。
3、菌種保存

	臨時保存法	甘油管藏法
適用對象	頻繁使用的菌種	長期保存的菌種
培養(yǎng)及類型	固體斜面培養(yǎng)基	液體培養(yǎng)基
溫度	4℃	-20℃
方法	菌落長成后于冰箱中保存，每3～6個月將菌種從舊的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上	將培養(yǎng)的菌液與等體積滅菌后的甘油混合均勻后于冷凍箱內(nèi)保存
缺點	菌種易被污染或產(chǎn)生變異	\\

（1）測定泡菜中亞硝酸鹽的含量可以用比色法。

（2）①該培養(yǎng)基因含碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣，從而在菌落周圍形成溶鈣圈，該培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基。
②小組成員將泡菜液進行梯度稀釋后，取0.1ml加入到50℃左右的培養(yǎng)基中搖勻，待凝固后，再在其上加蓋一層固體培養(yǎng)基，在50℃左右操作的原因是此時培養(yǎng)基為液態(tài)且不燙手，加蓋一層固體培養(yǎng)基的目的是隔絕空氣（氧氣），確保無氧環(huán)境。
③使用平板劃線法時，在進行第二次以及其后的劃線操作時要從上一次劃線的末端開始劃線，如圖丙所示。
④長期保存菌種應(yīng)該用甘油管藏法，因此乳酸菌在-20℃的冷凍箱中長期保存時，需要加入一定量的甘油。