Question

【題目】科學(xué)家將魚抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相對寒冷的環(huán)境中生長。質(zhì)粒上有Pst I、Sma I、Hind Ⅲ、Alu I等四種限制酶切割位點(diǎn)，下圖是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程的示意圖（ampr為抗氨芐青霉素基因），其中①～④是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程中的相關(guān)步驟，Ⅰ、Ⅱ表示相關(guān)結(jié)構(gòu)或細(xì)胞。請據(jù)圖回答：

（1）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實(shí)例中，應(yīng)該選用限制酶_____________分別對________________進(jìn)行切割，切割后產(chǎn)生的DNA片段分別為_____和_________種。

（2）培養(yǎng)基中的氨芐青霉素會(huì)抑制番茄愈傷組織細(xì)胞的生長，要利用該培養(yǎng)基篩選含魚的抗凍蛋白基因的番茄細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體I中含有__________作為標(biāo)記基因。

（3）通常采用__________________技術(shù)，在分子水平檢測目的基因是否翻譯形成了相應(yīng)的蛋白質(zhì)。

（4）利用組織培養(yǎng)技術(shù)特含魚的抗凍蛋白基因的番茄組織細(xì)胞培育成植株。圖中③、④依次表示組織培養(yǎng)過程中番茄組織細(xì)胞的______________________________過程。

Answer 1

【答案】（1）Pst I和Sma I 含魚抗凍蛋白基因的DNA、質(zhì)粒 4 2

（2）氨芐青霉素抗性基因

（3）抗原－抗體雜交

（4）脫分化、去分化

【解析】

試題分析：（1）Alu I切割會(huì)破壞目的基因，不能用；目的基因所在DNA片段無Hind Ⅲ切割位點(diǎn)，不能用；都用Sma I或都用Pst I切割會(huì)生成相同末端發(fā)生任意連接，故應(yīng)該選用限制酶Pst I和Sma I分別對含魚抗凍蛋白基因的DNA、質(zhì)粒進(jìn)行切割，含魚抗凍蛋白基因的DNA會(huì)生成4種不同DNA片段，而質(zhì)粒2種。

（2）基因表達(dá)載體I中含有氨芐青霉素抗性基因，會(huì)表現(xiàn)出抗氨芐青霉素性狀，成功導(dǎo)入基因表達(dá)載體番茄愈傷組織細(xì)胞在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基能夠正常生長。

（3）從轉(zhuǎn)基因生物提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)抗體進(jìn)行抗原－抗體雜交，如果會(huì)雜交帶出現(xiàn)，表明目的基因已經(jīng)形成蛋白質(zhì)產(chǎn)品。

（4）圖中③為高度分化植物體細(xì)胞形成未分化的愈傷組織過程，為脫分化；④表示愈傷組織形成幼根和芽過程，為再分化。