Question

【題目】鐵皮石斛位居中華九大“仙草”之首，其富含多糖成分。研究表明鐵皮石斛多糖對細胞增殖有一定的促進作用，OD值能反映細胞增殖水平。為研究其不同濃度、不同處理時間的促進效果。請根據(jù)以下實驗材料，提出并完善實驗思路，對實驗結(jié)果進行處理。

材料與用具：400 hg/mL的鐵皮石斛多糖溶液、生理鹽水、小鼠胚胎干細胞（mES）、細胞培養(yǎng)液、5%二氧化碳培養(yǎng)箱、96孔細胞培養(yǎng)板、移液器、0.05%胰蛋白酶等

（說明：不考慮加入多糖對體積的影響；96孔細胞培養(yǎng)板的孔內(nèi)可進行細胞培養(yǎng)，圖中大寫字母表示組別； 3天內(nèi)每隔24小時計數(shù)一次，OD值的具體測法不作要求，實驗條件適宜）

（1）實驗思路：(實驗分組用表格形式表示）

①____________________________________。

②____________________________________。

③____________________________________。同時設置G組為不加mES的空白對照組。

④____________________________________。

⑤____________________________________。

（2）實驗證明，鐵皮石斛多糖濃度在50%/mL200μg/mL時，處理24h、48h、72h均對mES的增殖有促進效果，處理時間與效果呈正相關，且濃度為100μg/mL時達到最高點。請用曲線圖在一個坐標系中表示該實驗結(jié)果。

Answer 1

【答案】 利用濃度為400μg/mL的鐵皮石斛多糖溶液和生理鹽水配制25μg/mL、50μg/mL、1OO μg/mL、200μg/mL的鐵皮石斛多糖溶液 按上述分組，用移液器取等量的小鼠胚胎干細胞和細胞培養(yǎng)液加到96孔細胞培養(yǎng)板的A—F組中培養(yǎng)，每個濃度做4個重復。同時G組設置為不加mES的空白對照組 將96孔細胞培養(yǎng)板置于37℃、5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 每24 h取對應組細胞用0.05%胰蛋白酶處理，測定每組細胞的OD值，并記錄分析統(tǒng)計實驗數(shù)據(jù)

【解析】本題考查實驗設計，細胞增殖相關知識，意在考察考生對知識點的理解和應用能力。

（1）本課題研究的是鐵皮石斛多糖在不同濃度、不同處理時間對細胞增殖的促進效果，所以實驗的自變量是不同濃度的鐵皮石斛多糖和不同的處理時間，因變量是細胞的OD值。根據(jù)所給實驗結(jié)果鐵皮石斛多糖濃度在50%/mL200μg/mL時，處理24h、48h、72h，所以應配制鐵皮石斛多糖濃度在50%/mL200μg/mL時，處理24h、48h、72h。

而所給的實驗材料是400μg/mL的鐵皮石斛多糖溶液，所以實驗步驟應首先利用濃度為400μg/mL的鐵皮石斛多糖溶液和生理鹽水配制25μg/mL、50μg/mL、1OO μg/mL、200μg/mL的鐵皮石斛多糖溶液。然后進行分組并培養(yǎng)不同的時間即表格所述：

為按上述分組，用移液器取等量的小鼠胚胎干細胞和細胞培養(yǎng)液加到96孔細胞培養(yǎng)板的A—F組中培養(yǎng)，每個濃度做4個重復。同時G組設置為不加mES的空白對照組。將其放在相同且適宜的條件下培養(yǎng)，即將96孔細胞培養(yǎng)板置于37℃、5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)， 每24 h取對應組細胞用0.05%胰蛋白酶處理，測定每組 細胞的OD值，并記錄分析統(tǒng)計實驗數(shù)據(jù)。

（2）根據(jù)實驗結(jié)果，以濃度為橫坐標，以OD值為縱坐標，然后做出不同時間的圖像，要表示出處理時間與效果呈正相關，且濃度為100μg/mL時達到最高點，即