Question

（15分）轉(zhuǎn)基因生物可用于生產(chǎn)人類所需要的藥用蛋白，如激素、抗體、疫苗、酶等。

圖一是通過(guò)生物工程培育能產(chǎn)生人胰島素?zé)煵莸倪^(guò)程。請(qǐng)據(jù)圖回答：

（1）基因工程的核心步驟是______（填字母）。此過(guò)程所需的工具酶是                    

（2）下圖二是運(yùn)載體和反轉(zhuǎn)錄得到的胰島素基因的片段，已知限制酶I的識(shí)別序列和切點(diǎn)是—G↓GATCC－，限制酶Ⅱ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是－↓GATC－。GeneI和 GeneII為質(zhì)粒上的標(biāo)記基因，根據(jù)圖分析, 應(yīng)用限制酶           切割質(zhì)粒，用限制酶         切割目的基因。構(gòu)建的重組質(zhì)粒中,除含有外源基因、標(biāo)記基因外,還必須含有          和           。

（3）B過(guò)程中，常用_________處理使細(xì)菌成為感受態(tài)細(xì)胞，從而利于重組質(zhì)粒的導(dǎo)入。

（4）如果從分子水平檢測(cè)人胰島素基因是否表達(dá)成功，可以采用                 方法。

 

 

Answer 1

【答案】

（1）A      限制酶和DNA連接酶

（2）I     Ⅱ（1分）    啟動(dòng)子     終止子

（3）Ca²⁺    （4）抗原-抗體雜交

【解析】

試題分析：（1）基因工程的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，為圖一的A；此過(guò)程所需的工具酶是限制酶和DNA連接酶。

（2）根據(jù)圖分析,應(yīng)用限制酶I來(lái)切割質(zhì)粒，這樣只破壞GeneII，保留GeneI；如果用限制酶Ⅱ切割質(zhì)粒，GeneII和GeneI都被破壞，基因表達(dá)載體就無(wú)標(biāo)記基因。而胰島素基因片斷一端為限制酶I的識(shí)別序列—G↓GATCC－，一端為限制酶Ⅱ的識(shí)別序列－↓GATC－；如果用限制酶I來(lái)切割，只能切割一端，用限制酶Ⅱ切割，則兩端都能切割，這樣才能獲取胰島素基因。構(gòu)建的重組質(zhì)粒中,除含有外源基因、標(biāo)記基因外,還必須含有啟動(dòng)子（基因轉(zhuǎn)錄信號(hào)）和終止子（轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)）。

（3）圖一B為基因表達(dá)載體導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌過(guò)程，通常用Ca²⁺處理細(xì)菌，使之處于一種能吸收周圍環(huán)境中的DNA的生理狀態(tài)，即感受態(tài)細(xì)胞。

（4）如果從分子水平檢測(cè)人胰島素基因是否表達(dá)成功，可以從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交，如果有雜交帶出現(xiàn)，表明目的基因成功表達(dá)。

考點(diǎn)：本題考查基因工程相關(guān)知識(shí)，意在考查考生能理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，把握知識(shí)間的內(nèi)在聯(lián)系能力和識(shí)圖能力。