Question

【題目】請根據(jù)血紅蛋白的提取和分離流程圖回答下列問題：

（1）將實(shí)驗(yàn)流程按先后順序補(bǔ)充完整：________、_________。

（2）凝膠色譜法的基本原理是根據(jù)________________分離蛋白質(zhì)。

（3）洗滌紅細(xì)胞的目的是去除_________，洗滌干凈的標(biāo)志是________________。為防止血液凝固，在采血容器中通常要預(yù)先加入___________。

（4）凝膠色譜操作結(jié)束后，需要用電泳來對蛋白質(zhì)進(jìn)行純度鑒定，電泳利用了待分離樣品中各種分子的 ____________的特性，使帶電分子產(chǎn)生不同的________，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。

（5）SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳中，SDS能與各種蛋白質(zhì)結(jié)合形成蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物，由于SDS_________，從而使電泳的遷移率完全取決于分子的大小。

Answer 1

【答案】血紅蛋白的釋放 凝膠色譜柱的裝填 蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量的大小 雜蛋白（或血漿蛋白） 離心后的上清液不再呈現(xiàn)黃色 檸檬酸鈉 帶電性質(zhì)差異以及分子本身的大小、性狀的不同 遷移速度 所帶負(fù)電荷的量大大超過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量，因而掩蓋了不同種蛋白質(zhì)間的電荷差別

【解析】

理清血紅蛋白的提取和分離的實(shí)驗(yàn)原理、樣品處理和凝膠色譜操作的流程及其注意事項(xiàng)等相關(guān)知識。在此基礎(chǔ)上，以圖示中的“箭頭指向和文字信息”為切入點(diǎn)，從中把握所蘊(yùn)含的生物學(xué)信息，進(jìn)而對相關(guān)題情境進(jìn)行分析解答。

（1）血紅蛋白的提取和分離流程為：紅細(xì)胞的洗滌→血紅蛋白的釋放→分離血紅蛋白溶液→透析→凝膠色譜柱的制作→凝膠色譜柱的裝填→樣品的加入和洗脫�？梢姡�A表示血紅蛋白的釋放，B表示凝膠色譜柱的裝填。

（2）凝膠色譜法的基本原理是：根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)。

（3）洗滌紅細(xì)胞的目的是去除雜蛋白，以利于后續(xù)步驟的分離純化。洗滌干凈的標(biāo)志是離心后的上清液不再呈現(xiàn)黃色。為防止血液凝固，在采血容器中要預(yù)先加入抗凝血劑檸檬酸鈉，其比例是每100mL血液加入3.0g檸檬酸鈉。

（4）電泳利用了待分離樣品中各種分子的帶電性質(zhì)差異以及分子本身的大小、性狀的不同的特性，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。

（5）SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳中，SDS能與各種蛋白質(zhì)結(jié)合形成蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物，由于SDS所帶負(fù)電荷的量大大超過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量，因而掩蓋了不同種蛋白質(zhì)間的電荷差別，從而使電泳的遷移率完全取決于分子的大小。