Question

【題目】多氯聯(lián)苯是一種對人體有很大危害的有機物質，污染土壤后，很難清除。研究發(fā)現(xiàn)，部分酵母菌具有分解多氯聯(lián)苯的作用。為消除這種污染，科研人員計劃從污染的土壤中篩選出高效分解多氯聯(lián)苯的菌株。請回答問題：

（1）篩選分解多氯聯(lián)苯的菌株時，應將土壤樣品__________，接種到以__________為唯一碳源的培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于__________培養(yǎng)基。

（2）對初步提取到的菌株要進行____________________培養(yǎng)，一般操作方法有兩種，其中之一是下圖所示的__________法。

稀釋倍數(shù) 菌落數(shù) 平板編號	1	2	3
10	420	495	393
100	45	57	51
1000	2	7	3

（3）將酵母菌溶液分別稀釋10倍、100倍、1000倍。每個濃度都接種三個平板，每個平板均接入0.1mL稀釋菌液，該接種方法是__________。培養(yǎng)時，需將培養(yǎng)皿__________培養(yǎng)，以防冷凝水造成污染。經適當培養(yǎng)后，平板上的菌落數(shù)如上表所示：據(jù)此可得出，每升菌液中酵母菌活菌數(shù)為__________個。

Answer 1

【答案】 稀釋（溶解） 多氯聯(lián)苯 選擇 純化 平板劃線 稀釋涂布平板 倒置 5.1×107

【解析】試題分析：本題主要考查微生物的培養(yǎng)與應用的相關問題，利用選擇培養(yǎng)基篩選出高效分解多氯聯(lián)苯的菌株，其中涉及培養(yǎng)基的配置與選擇，器具的滅菌方法，細菌分離純化及計數(shù)方法等。需要學生掌握以下知識點，1、培養(yǎng)基按功能分為兩類，選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基，兩種培養(yǎng)基的制備方法、特征及用途見下表：

種類	制備方法	特 征	用 途
選擇培養(yǎng)基	培養(yǎng)基中加入某種化學成分，抑制不需要微生物的生長	根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養(yǎng)基，使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選率	培養(yǎng)分離出特定微生物，如：加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌
鑒別培養(yǎng)基	在培養(yǎng)基中加入某種試劑或化學藥品	依據(jù)微生物產生的某種代謝產物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學藥品反應，產生明顯的特征變化而設計	鑒別和區(qū)分菌落相似的微生物，如伊紅和美藍培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌

2、微生物常見的接種的方法①平板劃線法：將已經熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經培養(yǎng)后可形成單個菌落。

（1）篩選分解多氯聯(lián)苯的菌株時，應將土壤樣品稀釋，接種到以多氯聯(lián)苯為唯一碳源的培養(yǎng)基上；只有能分解多氯聯(lián)苯的菌株才能在這樣的培養(yǎng)基中生存，因此從功能上講，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。

（2）對初步提取到的菌株要進行純化培養(yǎng)，一般操作方法有兩種，即平板劃線法和稀釋涂布平板法，圖示是利用平板劃線法進行微生物接種，把聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。

（3）將酵母菌溶液分別稀釋10倍、100倍、1000倍。每個濃度都接種三個平板，每個平板均接入0.1mL稀釋菌液，該接種方法是稀釋涂布平板。培養(yǎng)時，需將培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)，以防冷凝水造成污染。對菌落進行計數(shù)時，一般選擇菌落數(shù)在30～300的進行記數(shù)，求其平均值，因此選擇稀釋100倍的三個培養(yǎng)基進行計算，每升溶液中酵母菌活菌數(shù)=（45+57+51）÷3÷0.1×100×1000=5.1×107個/L。