Question

【題目】PCR技術(shù)現(xiàn)在已經(jīng)應(yīng)用到臨床診斷、法醫(yī)鑒定、分子生物學(xué)、農(nóng)牧業(yè)等領(lǐng)域。凡是涉及到DNA分子操作的研究工作，幾乎都需要用到PCR技術(shù)。下圖為某同學(xué)實(shí)驗(yàn)中，所用引物與模板配對情況。回答相關(guān)問題：

（1）在DNA復(fù)制中引物所起的作用是________。若所用引物為Ⅰ和Ⅱ進(jìn)行擴(kuò)增可以獲得______種序列不同的產(chǎn)物；若用引物Ⅱ和Ⅲ可以獲得_______種序列不同的產(chǎn)物。

（2）PCR技術(shù)中，復(fù)性是指引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈。復(fù)性溫度過高會引起堿基之間的氫鍵斷裂，導(dǎo)致______牢固結(jié)合，DNA擴(kuò)增效率下降；復(fù)性溫度過低會造成引物與模板的結(jié)合位點(diǎn)____________(填“增加”或“減少”），非特異性產(chǎn)物增加。

（3）利用DNA的哪一特點(diǎn)進(jìn)行DNA含量的測定？_________________。

Answer 1

【答案】 使DNA聚合酶能夠從引物的3ˊ端開始連接脫氧核苷酸 2 5 引物不能與互補(bǔ)DNA鏈（模板） 增加 DNA在260nm 的紫外線波段有一強(qiáng)烈的吸收峰

【解析】試題分析：明確PCR的原理、過程等相關(guān)知識，形成清晰的知識網(wǎng)絡(luò)，據(jù)此，從題意和圖示中提取有效信息，進(jìn)行相關(guān)問題的解答。

(1) DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA，而只能從DNA的3ˊ端延伸DNA鏈，因此在DNA復(fù)制中引物所起的作用是使DNA聚合酶能夠從引物的3ˊ端開始連接脫氧核苷酸。 DNA的合成方向總是從子鏈的5ˊ端向3ˊ端延伸。 若所用引物為Ⅰ和Ⅱ進(jìn)行擴(kuò)增，則新形成的DNA子鏈中不存在與引物Ⅰ和Ⅱ互補(bǔ)配對的堿基序列，因此可以獲得2種序列不同的產(chǎn)物。若用引物Ⅱ和Ⅲ進(jìn)行擴(kuò)增，因新形成的DNA子鏈中，有的含有與引物Ⅱ互補(bǔ)配對的堿基序列，有的含有與引物Ⅲ互補(bǔ)配對的堿基序列，則至少在連續(xù)擴(kuò)增3次后可以獲得如下圖所示的5種序列不同的產(chǎn)物（藍(lán)色的線段表示擴(kuò)增過程中新形成的DNA子鏈，Ⅱ和Ⅲ表示引物）。

(2) PCR技術(shù)中，復(fù)性是指引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈。復(fù)性溫度過高會引起堿基之間的氫鍵斷裂，導(dǎo)致引物不能與互補(bǔ)DNA鏈（模板）牢固結(jié)合，DNA擴(kuò)增效率下降；復(fù)性溫度過低可造成引物與模板錯配，導(dǎo)致引物與模板的結(jié)合位點(diǎn)增加，非特異性產(chǎn)物增加。

(3) DNA在260 nm的紫外線波段有一強(qiáng)烈的吸收峰，峰值的大小與DNA 的含量有關(guān)�？梢岳�用DNA的這一特點(diǎn)進(jìn)行DNA含量的測定。