Question

【題目】土壤中含有大量的難溶性磷酸鹽，為了從土壤中篩選出能夠?qū)㈦y溶性磷酸鹽轉(zhuǎn)化為植物能吸收的可溶性磷的優(yōu)良解磷菌株，以便將其添加到有機肥中，改善植物磷元素供應(yīng)。科研人員進(jìn)行如下實驗：

實驗原理：固體培養(yǎng)基中難溶性磷酸鹽在微生物的作用下溶解，會在菌落周圍形成透明圈（如下圖），透明圈直徑（D）與菌落直徑（d）的比值（D/d）代表微生物溶解磷的能力大小。

實驗步驟：

步驟1 取某地區(qū)土樣5g制得土壤溶液后稀釋，取稀釋液1mL接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基A上，在適宜溫度下培養(yǎng)72h。

步驟2 在基礎(chǔ)培養(yǎng)基A上用接種環(huán)挑取代表性菌落再次接種，培養(yǎng)3～4d后觀察菌落特征和透明圈的大小，初步篩選出三種優(yōu)良解磷菌株（如下表）。

菌株	透明圈直徑（D）	菌落直徑（d）	D/d
M-3-01	18．8	12．3	1．5
B3-5-6	20．7	8．0	2．6
T1-4-01	9．1	6．5	1．4

分析回答：

（1）從物理形態(tài)看，培養(yǎng)基A屬于______培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中磷源應(yīng)該是______。

（2）根據(jù)實驗結(jié)果可以確定溶解磷能力最強的菌株是______。

（3）為進(jìn)一步測定初步篩選的三種菌株實際溶解磷的能力，研究人員將它們接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基B中，并在37℃、200 r·min-1 搖床培養(yǎng)，定期取上清液，測定溶液中可溶性磷含量，得到下圖所示曲線。

①用搖床進(jìn)行培養(yǎng)的好處是增加培養(yǎng)液中的______；使菌株與______充分接觸，有利于物質(zhì)的交換。

②結(jié)果表明最優(yōu)良的解磷菌株是______。

（4）在純化菌種時接種了5個平板，每個平板均接種了0．l mL樣品并培養(yǎng)。其中平板的菌落分布如圖：

推測出現(xiàn)該平板可能的操作失誤是_____。其余的甲、丙、丁、戊平板操作正常，其菌落數(shù)分別是210、230、470、190，則樣品中菌種的數(shù)量為_____個／mL。

Answer 1

【答案】 固體 難溶性磷酸鹽 B3-5-6 溶氧量 培養(yǎng)液 M-3-01 涂布不均勻 2100

【解析】分析題圖和表格：“透明圈直徑(D)與菌落直徑(d)的比值（D/d）代表微生物溶解磷的能力大小”，結(jié)合表格可知，菌株B3-5-6的比值（D/d）最大，說明菌株乙的溶解磷的能力最大。

(1) 從物理形態(tài)分，培養(yǎng)基分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基。菌落只有在固體培養(yǎng)基上才能形成(培養(yǎng)過程中菌體不能運動)；要篩選溶解難溶性磷能力強的菌株，必須以難溶性磷酸鹽作為唯一磷源。

(2) 根據(jù)實驗原理中“透明圈直徑(D)與菌落直徑(d)的比值（D/d）代表微生物溶解磷的能力大小”，結(jié)合表格數(shù)據(jù)可以確定溶解磷能力最強的菌株是B3-5-6。

(3)①搖床培養(yǎng)是實驗室培養(yǎng)需氧微生物常用的方法，使用搖床培養(yǎng)，不僅可以增大培養(yǎng)液中溶氧量，促進(jìn)微生物的有氧呼吸，而且能夠增加菌體與培養(yǎng)液的接觸，提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用率。

②根據(jù)實驗曲線圖，不難看出M-3-01實際溶解磷能力最強。

(4)乙平板中菌落的分布不均勻，推測其原因為涂布不均勻。利用稀釋涂布平板法計數(shù)時，選擇平板上的菌落數(shù)應(yīng)為30～300的才有效，故菌落數(shù)為470個的不能用于估算。對此樣品中菌種A的數(shù)量=（210+230+190）÷3÷0.1=2100個／mL。