Question

【題目】圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度（bp即堿基對）和部分堿基序列，圖2表示一種質粒的結構和部分堿基序列．現(xiàn)有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4種限制性核酸內切酶切割的堿基序列和酶切位點分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．請回答下列問題：

（1）圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個堿基之間依次由__（基團）連接。

（2）若用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段，產生的末端是__末端，其產物長度為_____。

（3）若圖1中虛線方框內的堿基對被T﹣A堿基對替換，那么基因D就突變?yōu)榛�因d．從雜合子分離出圖1及其對應的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，產物中共有____種不同DNA片段。

（4）啟動子是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的____，它是__識別與結合的位點，促進轉錄的開始。

（5）若將圖2中質粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進行，形成重組質粒，那么應選用的限制酶是_____。在導入重組質粒后，為了篩選出含重組質粒的大腸桿菌，一般需要用添加____的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。

Answer 1

【答案】 脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖 平 537bp、790bp、661bp 4 首端 RNA聚合酶 BamH I 抗生素B

【解析】試題分析：根據(jù)圖1分析，DNA片段含有兩個SmaⅠ識別位點，第一個識別位點在左端534bp序列向右三個堿基對的位置；第二個識別位點在右端658bp序列向左三個堿基的位置。根據(jù)圖2分析，若使用MboI會同時破壞質粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，所以要用BamHI來切割目的基因和質粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基因，便于篩選出含有重組質粒的受體細胞。

（1）一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個堿基之間依次由脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖連接。

（2）限制酶SmaⅠ的酶切位點是CCC↓GGG，其切割產生的是平末端。圖1中DNA片段含有兩個SmaⅠ酶切位點，被SmaⅠ酶完全切割后出現(xiàn)三個長度的片段，分別是537bp、790bp、661bp。

（3）雜合子的基因型為Dd，其中D基因片段有兩個SmaⅠ酶切位點，完全切割后出現(xiàn)三個片段長度分別是537bp、790bp、661bp，發(fā)生基因突變后的d基因片段只有一個SmaⅠ酶切位點，完全切割后出現(xiàn)兩個片段長度分別是1327bp、661bp，所以從雜合子中分離的DNA片段被限制酶SmaⅠ完全切割后形成會4種不同的DNA片段。

（4）啟動子是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的首端，啟動子是RNA聚合酶的識別和結合位點，能啟動轉錄過程。

（5）限制酶MspⅠ和SmaⅠ的切割位點位于目的基因D上，若用這兩種酶切割會被破壞目的基因D；運載體的兩個標記基因上都有限制酶MboⅠ的切割位點，用該酶切割會破壞這兩個標記基因，因此只能選用限制酶BamHⅠ切割外源DNA分子和運載體。用限制酶BamHⅠ切割質粒會破壞抗生素A抗性基因，但不會破壞抗生素B抗性基因，所以導入重組質粒的大腸桿菌能在含有抗生素B的培養(yǎng)基上生存，因此為了篩選出含重組質粒的大腸桿菌，一般需要用添加抗生素B的培養(yǎng)基培養(yǎng)。