Question

【題目】請回答以下有關基因工程的問題：

（1）基因工程中切割DNA的工具酶是______________。DNA連接酶根據(jù)其來源不同，分為__________和___________。

（2）利用PCR技術擴增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成_______。該過程中需要的酶是___________。

（3）將目的基因導入植物細胞采用最多的方法是_______________，依據(jù)該法的侵染特點，目的基因將插入到Ti質粒的_______上，經(jīng)過轉化作用，進入植物細胞，并將其插入到____________，從而使其得以維持穩(wěn)定和表達。

Answer 1

【答案】限制性核酸內切酶（限制酶）??? E·coli DNA連接酶??? T4DNA連接酶??? 引物??? 耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）??? 農(nóng)桿菌轉化法??? T-DNA??? 植物細胞染色體的DNA上???

【解析】

基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

（3）將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術，個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）基因工程中切割DNA的工具酶是限制性核酸內切酶（限制酶）。DNA連接酶根據(jù)其來源于大腸桿菌或T4噬菌體，分為E·coli DNA連接酶和T4DNA連接酶。

（2）利用PCR技術擴增目的基因需要一段已知目的基因的核苷酸序列，即引物，PCR技術中有高溫解旋的步驟，因此需要耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）。

（3）將目的基因導入植物細胞采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉化法，這種方法是利用農(nóng)桿菌能侵染雙子葉植物的特點，將目的基因插入到Ti質粒的T-DNA上，經(jīng)過轉化作用，進入植物細胞，并將其插入到植物細胞染色體的DNA上，從而使其得以維持穩(wěn)定和表達。