Question

【題目】圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度（bp即堿基對）和部分堿基序列，圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列。現(xiàn)有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4種限制性核酸內(nèi)切酶切割的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。請回答下列問題：

（1）圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間依次由 （基團(tuán)）連接。

（2）若用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段，產(chǎn)生的末端是 末端，其產(chǎn)物長度為 。

（3）若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對被T－A堿基對替換，那么基因D就突變?yōu)榛��?/span>d。從雜合子分離出圖1及其對應(yīng)的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，產(chǎn)物中共有 種不同DNA片段。

（4）若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進(jìn)行，形成重組質(zhì)粒，那么應(yīng)選用的限制酶是 。在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加 的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)檢測，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達(dá)，其最可能的原因是 。

（5）有關(guān)質(zhì)粒描述錯(cuò)誤的是（ ）

A、質(zhì)粒是能夠自我復(fù)制的環(huán)狀DNA分子

B、質(zhì)粒是唯一的載體

C、質(zhì)粒上有多個(gè)酶切位點(diǎn)

D、質(zhì)粒可在宿主外單獨(dú)復(fù)制

Answer 1

【答案】（1）脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖

（2）平 537bp、790bp、661bp

（3）4

（4）BamH I 抗生素B 同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向連接

（5）B、D

【解析】（1）一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間依次由脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖連接。

（2）限制酶SmaⅠ的酶切位點(diǎn)是CCC↓GGG，其切割產(chǎn)生的是平末端。圖1中DNA片段含有兩個(gè)SmaⅠ酶切位點(diǎn)，被SmaⅠ酶完全切割后出現(xiàn)三個(gè)長度的片段，分別是537bp、790bp、661bp．

（3）雜合子的基因型為Dd，其中D基因片段有兩個(gè)SmaⅠ酶切位點(diǎn)，完全切割后出現(xiàn)三個(gè)片段長度分別是537bp、790bp、661bp，發(fā)生基因突變后的d基因片段只有一個(gè)SmaⅠ酶切位點(diǎn)，完全切割后出現(xiàn)兩個(gè)片段長度分別是1327bp、661bp，所以從雜合子中分離的DNA片段被限制酶SmaⅠ完全切割后會形成四種不同的DNA片段。

（4）基因表達(dá)載體構(gòu)建的過程中需要利用限制酶和DNA連接酶。限制酶MspⅠ和SmaⅠ的切割位點(diǎn)位于目的基因D上，若用這兩種酶切割會被破壞目的基因D；載體的兩個(gè)標(biāo)記基因上都有限制酶MboⅠ的切割位點(diǎn)，用該酶切割會破壞這兩個(gè)標(biāo)記基因，因此只能選用限制酶BamHⅠ切割外源DNA分子和載體。用限制酶BamHⅠ切割質(zhì)粒會破壞抗生素A抗性基因，但不會破壞抗生素B抗性基因，所以導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌能在含有抗生素B的培養(yǎng)基上生存，因此為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加抗生素B的培養(yǎng)基培養(yǎng)。由于同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向連接，這樣會導(dǎo)致部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達(dá)。

（5）質(zhì)粒是能夠自我復(fù)制的環(huán)狀DNA分子，質(zhì)粒上有多個(gè)酶切位點(diǎn)，病毒也可以作為載體，質(zhì)粒必須在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制。