Question

【題目】血紅蛋白是人和其他脊椎動物紅細胞的主要組成成分，負責血液中O2或CO2的運輸。據(jù)血紅蛋白的提取和分離流程圖回答問題。

（1）將實驗流程補充完整：A為_____，凝膠色譜法是根據(jù)_____來分離蛋白質(zhì)的有效方法。

（2）洗滌紅細胞的目的是去除_____。洗滌干凈的標志是_____。釋放血紅蛋白的過程中起作用的物質(zhì)有_____。

（3）在洗脫過程中加入物質(zhì)的量濃度為20mol/L的磷酸緩沖液（pH為7.0）的目的是_____。

（4）在裝填色譜柱時不得有氣泡存在，因為_____。在凝膠色譜操作過程中，不能發(fā)生洗脫液流干、露出凝膠顆粒的情況，一旦發(fā)生這種情況，需重新裝填凝膠色譜柱。如果紅色區(qū)帶均勻一致地移動，說明色譜柱制作成功。

Answer 1

【答案】血紅蛋白的釋放 相對分子質(zhì)量的大小 雜蛋白（血漿蛋白） 離心后的上清液中沒有黃色 蒸餾水和甲苯 準確模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境，保持體外的pH和體內(nèi)一致 氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果

【解析】

1、血紅蛋的提取與分離的實驗步驟主要有(1)樣品處理：紅細胞的洗滌→血紅蛋白的釋放→分離血紅蛋白溶液→透析；（2）粗分離；（3）純化：凝膠色譜柱的制作→凝膠色譜柱的裝填→樣品的加入和洗脫；（4）純度鑒定——聚丙烯酰胺膠電泳。

2、凝膠色譜法的原理是：分子量大的分子通過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動快；分子量小的分子穿過多孔凝膠顆粒內(nèi)部，路程長，流動慢。所以凝膠色譜法是根據(jù)相對分子質(zhì)量大小而達到蛋白質(zhì)分離的有效方法。

3、洗滌紅細胞的目的是去除雜質(zhì)蛋白，釋放血紅蛋白的過程是讓紅細胞吸水漲破。如果分層不明顯，可能是洗滌次數(shù)少，無法除去血漿蛋白。此外，離心速度過高和時間過長，會使白細胞和淋巴細胞一同沉淀，也得不到純凈的紅細胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度。重復洗滌三次，直至上清液中沒有黃色，表明紅細胞已洗滌干凈，因為甲苯是表面活性劑的一種，可將細胞膜溶解，從而使細胞破裂。釋放血紅蛋白的過程中起作用的是蒸餾水和甲苯。

4、磷酸緩沖液（PH為7.0)能夠準確模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境，保持體外的pH和體內(nèi)的一致。如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻一致地移動，隨著洗脫液緩慢流出；如果紅色區(qū)帶歪曲、散亂、變寬,說明分離的效果不好，這與凝膠色譜柱的裝填有關(guān)。

據(jù)分析可知：

（1）將實驗流程補充完整：A為血紅蛋白的釋放，凝膠色譜法是根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小來分離蛋白質(zhì)的有效方法。

（2）洗滌紅細胞的目的是去除雜蛋白（血漿蛋白）。洗滌干凈的標志是離心后的上清液中沒有黃色。釋放血紅蛋白的過程中起作用的物質(zhì)有蒸餾水和甲苯。

（3）在洗脫過程中加入物質(zhì)的量濃度為20mol/L的磷酸緩沖液（pH為7.0）的目的是準確模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境，保持體外的pH和體內(nèi)一致。

（4）在裝填色譜柱時不得有氣泡存在，因為氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果。