Question

【題目】在遺傳病監(jiān)測(cè)及刑偵破案中常需要對(duì)樣品DNA進(jìn)行分析，PCR技術(shù)能快速擴(kuò)增DNA片段，在幾個(gè)小時(shí)內(nèi)復(fù)制上百萬(wàn)份的DNA拷貝，有效地解決了因?yàn)闃悠分蠨NA含量太低而難以對(duì)樣品進(jìn)行分析研究的問(wèn)題。據(jù)圖回答相關(guān)問(wèn)題：

(1) 在PCR中先用95 ℃高溫處理的目的是________；而這一過(guò)程中在細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制時(shí)是通過(guò)________實(shí)現(xiàn)的。

(2) 在PCR技術(shù)中所需要的引物實(shí)質(zhì)上是一種________，在相應(yīng)的橫線上寫出引物Ⅱ________�！�

(3) 在相應(yīng)的橫線上寫出循環(huán)一次后生成的DNA：________(寫出①、②中的一種即可)。

(4) 若將1個(gè)DNA分子拷貝10次，則需要在緩沖液中至少加入________個(gè)引物。

(5) 在對(duì)樣品DNA進(jìn)行分析的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，DNA摻雜著一些組蛋白，要去除這些組蛋白可加入的物質(zhì)是________。

Answer 1

【答案】 使DNA變性(使DNA的兩條鏈解開) 解旋酶的催化 (一小段)單鏈DNA或RNA分子 5′—G—A—OH(或HO—A—G—5′) 或 211－2(或答2046) 蛋白酶

【解析】本題考查基因工程中的PCR技術(shù)，解題要點(diǎn)是對(duì)PCR技術(shù)的原理、步驟的識(shí)記。

（1）在PCR技術(shù)中，用95 ℃高溫處理的目的是使DNA分子中的氫鍵斷裂，兩條鏈解開，即使DNA分子變性。這一過(guò)程在細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制時(shí)是通過(guò)解旋酶的催化實(shí)現(xiàn)的。

（2）引物實(shí)質(zhì)上是一段單鏈DNA或RNA分子，它能與解開的DNA母鏈的3′端結(jié)合，為DNA聚合酶提供吸附位點(diǎn)。引物Ⅱ的序列是：5′—G—A—OH。

（3）根據(jù)（2）的分析，循環(huán)一次后生成的DNA是：或

（4）在DNA分子擴(kuò)增時(shí)，需要2種引物，由于新合成的子鏈都需要引物作為復(fù)制的起點(diǎn)，故所需的引物數(shù)目等于新合成的DNA子鏈數(shù)目，即2×210－2個(gè)。

（5）蛋白酶能催化蛋白質(zhì)分解，故除去DNA中摻雜的組蛋白可加入蛋白酶。

[點(diǎn)睛]：PCR技術(shù)易錯(cuò)的知識(shí)點(diǎn)：關(guān)于引物的設(shè)計(jì)：引物長(zhǎng)度約17個(gè)堿基；兩個(gè)引物之間不應(yīng)發(fā)生互補(bǔ)；引物與DNA模板鏈結(jié)合如圖所示：