Question

【題目】編碼蛋白甲的DNA序列（序列甲）由A、B、C、D、E五個(gè)片段組成，編碼蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段組成，如圖1所示．

回答下列問(wèn)題：
（1）現(xiàn)要通過(guò)基因工程的方法獲得蛋白乙，若在啟動(dòng)子的下游直接接上編碼蛋白乙的DNA序列（TTCGCTTCT…CAGGAAGGA），則所構(gòu)建的表達(dá)載體轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞后不能翻譯出蛋白乙，原因是 ．
（2）某同學(xué)在用PCR技術(shù)獲取DNA片段B或D的過(guò)程中，在PCR反應(yīng)體系中加入了DNA聚合酶、引物等，還加入了序列甲作為 ， 加入了作為合成DNA的原料．
（3）現(xiàn)通過(guò)基因工程方法獲得了甲、乙、丙三種蛋白，要鑒定這三種蛋白是否具有刺激T淋巴細(xì)胞增殖的作用，某同學(xué)做了如下實(shí)驗(yàn)：將一定量的含T淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)液平均分成四組，其中三組分別加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一組作為對(duì)照，培養(yǎng)并定期檢測(cè)T淋巴細(xì)胞濃度，結(jié)果如圖2．
①由圖2可知，當(dāng)細(xì)胞濃度達(dá)到a時(shí)，添加蛋白乙的培養(yǎng)液中T淋巴細(xì)胞濃度不再增加，此時(shí)若要使T淋巴細(xì)胞繼續(xù)增殖，可采用的方法是 ． 細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)箱中通常要維持一定的CO2濃度，CO2的作用是 ．
②僅根據(jù)圖、圖2可知，上述甲、乙、丙三種蛋白中，若缺少（填“A”“B”“C”“D”或“E”）片段所編碼的肽段，則會(huì)降低其刺激T淋巴細(xì)胞增殖的效果．

Answer 1

【答案】
（1）因?yàn)樵趩��?dòng)子的下游接上的編碼蛋白乙的DNA序列，不能啟動(dòng)
（2）模板DNA；4種脫氧核苷酸
（3）細(xì)胞培養(yǎng)（傳代培養(yǎng)）；維持培養(yǎng)液中的PH；C
【解析】解：（1）因?yàn)樵趩��?dòng)子的下游接上的編碼蛋白乙的DNA序列，不能啟動(dòng)編碼蛋白乙的DNA序列的轉(zhuǎn)錄，因此所構(gòu)建的表達(dá)載體轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞后不能翻譯出蛋白乙．（2）PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的條件需要：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）．序列甲作為模板DNA，DNA的原料為4種脫氧核苷酸．（3）①動(dòng)物細(xì)胞可以通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)（傳代培養(yǎng)）繼續(xù)增殖．細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，需要?dú)怏w環(huán)境，其中氣體CO2的作用是維持培養(yǎng)液中的PH．②分析坐標(biāo)圖：對(duì)比甲和乙蛋白刺激T淋巴細(xì)胞增殖情況發(fā)現(xiàn)：最終效果相當(dāng)，只是增殖時(shí)間不同，可以推斷出A、E片段編碼的肽段不會(huì)降低T淋巴細(xì)胞增殖效果．將丙蛋白分別與甲和乙蛋白刺激T淋巴細(xì)胞增殖情況比較發(fā)現(xiàn)：丙蛋白降低了T淋巴細(xì)胞增殖．丙基因與甲和乙基因相比較，缺少了一段C基因，也就是說(shuō)若缺少C片段所編碼的肽段，則會(huì)降低其刺激T淋巴細(xì)胞增殖的效果．
故答案為：（1）因?yàn)樵趩��?dòng)子的下游接上的編碼蛋白乙的DNA序列，不能啟動(dòng)（2）模板DNA 4種脫氧核苷酸（3）細(xì)胞培養(yǎng)（傳代培養(yǎng)） 維持培養(yǎng)液中的PH（4）C
1、PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因（適用于目的基因的核苷酸序列已知的情況）．PCR全稱(chēng)為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)，其原理是DNA復(fù)制，需要模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶），以指數(shù)的方式擴(kuò)增，即約2n．引物是一段短的單鏈RNA或DNA片段，可結(jié)合在核酸鏈上與之互補(bǔ)的區(qū)域，其功能是作為核苷酸聚合作用的起始點(diǎn)．2、基因表達(dá)載體的組成：目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因（1）啟動(dòng)子：是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需的蛋白質(zhì)．（2）終止子：也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的尾端．（3）標(biāo)記基因的作用：是為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)．常用的標(biāo)記基因是抗生素抗性基因．3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件：（1）無(wú)菌無(wú)毒環(huán)境：無(wú)菌﹣﹣對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無(wú)菌處理；在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素．；無(wú)毒﹣﹣定期更換培養(yǎng)液，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)自身造成危害．（2）營(yíng)養(yǎng)：
成分：所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同，例如需要有糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然成分．
培養(yǎng)基類(lèi)型：合成培養(yǎng)基（將細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)按其種類(lèi)和所需數(shù)量嚴(yán)格配制而成的培養(yǎng)基）（3）溫度和pH值：哺乳動(dòng)物多以36.5±0.5℃為宜，多數(shù)細(xì)胞生存的適宜pH為7.2～7.4．（4）氣體環(huán)境：通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶，將其置于含95%空氣加5%CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)．O2：是細(xì)胞代謝所必需的 CO2主要作用是維持培養(yǎng)液的pH．