Question

【題目】I．基因工程操作步驟中，需要從受體細(xì)胞群中篩選出已獲得目的基因的細(xì)胞，圖中①-③示一種篩選方法的過程。pBR322質(zhì)粒含有兩個抗性基因，分別是Amp（氨芐青霉素）抗性基因和Tet（四環(huán)素）抗性基因，其中在Tet抗性基因上有下列目的基因的插入位點(diǎn)（插入將導(dǎo)致Tet抗性基因功能性失活），請回答：

（1）圖中①過程所需的酶是___________________。

（2）經(jīng)過①過程，pBR322質(zhì)粒可能出現(xiàn)的兩種結(jié)果A是_______________________。

（3）②過程表示用含四環(huán)素（使細(xì)胞停止生長，但不致死）和環(huán)絲氨酸（使生長的細(xì)胞致死）的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)菌甲，則培養(yǎng)結(jié)果C表示在培養(yǎng)基中可能存活的細(xì)菌包括_________________。

（4）若要進(jìn)一步篩選出符合要求的受體細(xì)胞D，則③過程需要做的處理是（請參照過程②的方法）___________________________________________________。

II．基因工程中使用的II型限制性核酸內(nèi)切酶通�？梢宰R別長度為4-8個核苷酸的特異序列。下面示限制酶Sau3A I對DNA片段切割的結(jié)果。

……CAATGATCTCCTA…… Sau3A I ……CAAT + GATCTCCTA……

……GTTACTAGAGGAT…… ……GTTACTAG AGGAT……

（5）請分析，Sau3AI的識別序列以及切割位點(diǎn)（用“↓”表示）是______________。

III．下表列出了幾種限制酶的識別序列及其切割位點(diǎn)，圖1（含兩個抗性基因的質(zhì)粒）和圖2（含目的基因的外源DNA）中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。

限制酶	XhoI	BclI	SalI	BamHI	XbaI
識別序列及酶切位點(diǎn)	C↓TCGAG	T↓GATCA	G↓TCGAC	G↓GATCC	T↓CTAGA

（6）據(jù)圖1和圖2分析，為了使目的基因和質(zhì)粒實(shí)現(xiàn)定向連接和便于受體細(xì)胞的篩選，切割質(zhì)粒的限制酶應(yīng)選用_______________，切割含目的基因的外源DNA的酶應(yīng)選用________________。

Answer 1

【答案】DNA連接酶（DNA連接酶和限制酶） 目的基因成功插入（重組質(zhì)粒）、目的基因插入不成功（沒有發(fā)生重組的質(zhì)粒） 導(dǎo)入不成功的細(xì)菌和導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的細(xì)菌 將存活的細(xì)菌轉(zhuǎn)移到含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng) XbaⅠ和BclⅠ XbaⅠ和BclⅠ

【解析】

I．(1)圖中①過程為構(gòu)建基因表達(dá)載體過程，需要DNA連接酶和限制酶兩種工具酶；

（2）經(jīng)過②過程，pBR322質(zhì)�？赡艹霈F(xiàn)的兩種結(jié)果，即A是兩種質(zhì)粒：重組質(zhì)粒（目的基因成功插入）、沒有發(fā)生重組的質(zhì)粒（目的基因插入不成功）。

（3）②過程表示用含四環(huán)素（使細(xì)胞停止生長，但不致死）和環(huán)絲氨酸（使生長的細(xì)胞致死）的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)菌甲，根據(jù)題干可知，在該培養(yǎng)基上成活的細(xì)菌是導(dǎo)入不成功的細(xì)菌和導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的細(xì)菌。

（4）若要進(jìn)一步篩選出符合要求的受體細(xì)胞D，則③過程需要做的處理是：將存活的細(xì)菌轉(zhuǎn)移到含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。

II．（5）據(jù)圖分析可知，Sau3AI的識別序列以及切割位點(diǎn)是 。

III．（6）據(jù)圖1和圖2分析，為了使目的基因和質(zhì)粒實(shí)現(xiàn)定向連接和便于受體細(xì)胞的篩選，切割質(zhì)粒的限制酶應(yīng)選用XbaⅠ和BclⅠ，切割含目的基因的外源DNA的酶應(yīng)選用XbaⅠ和BclⅠ。