Question

研究人員從血管內(nèi)皮瘤中發(fā)現(xiàn)了一種新的血管增生抑制劑——內(nèi)皮抑素，它能有效地抑制血管增生。下面是獲得重組內(nèi)皮抑素的方法，請分析回答下列問題。

（1）從肝細胞中分離出相應的RNA，經(jīng)________獲得內(nèi)皮抑素基因，再經(jīng)________進行擴增，以獲得更多的目的基因。
（2）擴增的目的基因與pUC18質(zhì)粒(如圖所示)都用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ進行雙酶切，然后用DNA連接酶進行連接，構(gòu)建重組質(zhì)粒。雙酶切避免了目的基因與載體________連接，還減少了目的基因與目的基因、載體與載體的連接，提高了重組質(zhì)粒的比例。
（3）大腸桿菌pUC18質(zhì)粒的LacZ基因中如果沒有插入外源基因，LacZ基因便可表達出β半乳糖苷酶，當培養(yǎng)基中含有IPTG和Xgal時，Xgal便會被β半乳糖苷酶水解成藍色，大腸桿菌將形成藍色菌落。反之，則形成白色菌落。選擇培養(yǎng)基中除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機鹽、水、生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)外，還應加入的物質(zhì)有________和氨芐青霉素。成功導入重組質(zhì)粒的大腸桿菌在培養(yǎng)基中形成________顏色的菌落，原因是__________________。
（4）從選擇培養(yǎng)基中挑取所需的單個菌落接種于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，獲得粗提表達產(chǎn)物。將等量毛細血管內(nèi)皮細胞接種于細胞培養(yǎng)板，37 ℃培養(yǎng)。將等量不同濃度的粗提表達產(chǎn)物加進培養(yǎng)孔中，72 h后在顯微鏡下觀察細胞存活情況并統(tǒng)計(或記錄)活的內(nèi)皮細胞數(shù)目，實驗結(jié)果如下表所示。

粗提表達產(chǎn)物濃度/(μg·mL－1)	0	2	4	6	8	10
活的內(nèi)皮細胞數(shù)目(×102)	12	6	2	1	0.5	0.5

實驗結(jié)果說明_____________________________________________________
_____________________________________________________________。

Answer 1

(1)反轉(zhuǎn)錄(或逆轉(zhuǎn)錄)　 (聚合酶鏈式反應)(2)反向(任意)(3)IPTG、X－gal  　白　重組質(zhì)粒的LacZ基因中插入了目的基因，使LacZ基因不能表達出β－半乳糖苷酶(4)

解析試題分析：
（1）從肝細胞中分離出相應的RNA，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄(或逆轉(zhuǎn)錄)獲得內(nèi)皮抑素基因，再利用PCR技術(shù)進行體外擴增，以獲得更多的目的基因。
（2）雙酶切后，目的基因兩端的黏性末端不同，被切開的運載體兩端的黏性末端也不同，這樣可以避免目的基因與載體反向連接，還能減少目的基因與目的基因、載體與載體的連接，提高了重組質(zhì)粒的比例。
（3）大腸桿菌pUC18質(zhì)粒的LacZ基因中如果沒有插入外源基因，LacZ基因便可表達出β半乳糖苷酶，當培養(yǎng)基中含有IPTG和Xgal時，Xgal便會被β半乳糖苷酶水解成藍色，大腸桿菌將形成藍色菌落。反之，則形成白色菌落。選擇培養(yǎng)基中除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機鹽、水、生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)外，還應加入的物質(zhì)有IPTG、X－gal和氨芐青霉素。因為重組質(zhì)粒的LacZ基因中插入了目的基因，使LacZ基因不能表達出β－半乳糖苷酶，所以成功導入重組質(zhì)粒的大腸桿菌在培養(yǎng)基中形成白色菌落。
（4）由表中數(shù)據(jù)可知，粗提表達產(chǎn)物濃度越高，活的內(nèi)皮細胞數(shù)目越少，說明重組內(nèi)皮抑素(或粗提表達產(chǎn)物)能夠抑制毛細血管內(nèi)皮細胞的增殖。
考點：本題考查基因工程的相關知識。
點評：本題意在考查考生的理解應用能力和信息轉(zhuǎn)化能力，屬于中等難度題。