Question

【題目】紅細(xì)胞含有大量的血紅蛋白，我們可以選用豬、牛、羊或其他哺乳動(dòng)物的血液來提取和分離血紅蛋白，請(qǐng)回答下列有關(guān)問題：

（1）實(shí)驗(yàn)前取新鮮的血液，要切記在采血容器中預(yù)先加入檸檬酸鈉，取血回來，經(jīng)處理并離心，收集血紅蛋白溶液

①加入檸檬酸鈉的目的是________。

②以上所述的過程為樣品處理，它包括________、________、分離血紅蛋白溶液。

（2）收集的血紅蛋白溶液可以在透析袋中透析，這就是樣品的粗分離。

①透析的目的是______________。

②透析過程中需要用到________緩沖液。

Answer 1

【答案】防止血液凝固 紅細(xì)胞的洗滌 血紅蛋白的釋放 去除分子量較小的雜質(zhì) 磷酸

【解析】

蛋白質(zhì)的提取和分離：

1、原理：凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小來分離蛋白質(zhì)的有效方法，相對(duì)分子質(zhì)量小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程長(zhǎng)，移動(dòng)的速度慢，相對(duì)分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)不容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程短，移動(dòng)的速度快，因此相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)得以分離。

2、用磷酸緩沖液處理的目的是讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的pH范圍內(nèi)，維持其結(jié)構(gòu)和功能。

3、分離血紅蛋白溶液時(shí)，將攪拌好的混合液轉(zhuǎn)移到離心管中，經(jīng)過中速長(zhǎng)時(shí)離心后，可明顯看到試管中溶液分為4層，從上往下數(shù)，第1層為甲苯層，第2層為脂溶性物質(zhì)的沉淀層，第3層為血紅蛋白水溶液，第4層為雜質(zhì)沉淀層。

4、氣泡會(huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果。

5、血紅蛋白的提取與分離的實(shí)驗(yàn)步驟主要有：（1）樣品處理：①紅細(xì)胞的洗滌，②血紅蛋白的釋放，③分離血紅蛋白溶液。（2）粗分離：①分離血紅蛋白溶液，②透析。（3）純化：調(diào)節(jié)緩沖液面→加入蛋白質(zhì)樣品→調(diào)節(jié)緩沖液面→洗脫→收集分裝蛋白質(zhì)。（4）純度鑒定--SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。

6、電泳法是利用待測(cè)樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異和分子本身的大小、形狀不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離或鑒定。

（1）①加入檸檬酸鈉的目的是防止血液凝固。

②樣品處理包括紅細(xì)胞的洗滌、血紅蛋白的釋放、分離血紅蛋白溶液。

（2）①透析的目的是去除分子量較小的雜質(zhì)。

②透析過程中需要用到磷酸緩沖液。