Question

【題目】L-肉堿具有參與脂肪氧化、抗疲勞、延遲患阿爾茨海默綜合癥等功能。據(jù)報道大腸桿菌能將巴豆甜菜堿轉(zhuǎn)化成L-肉堿，但效率較低�？蒲腥藛T通過基因工程將BCD基因、F基因以及T基因?qū)�入到大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)以提高L-肉堿的轉(zhuǎn)化率。實驗過程及結(jié)果如下圖所示，分析并回答下列問題：

（1）實驗過程中用PCR技術(shù)獲得目的基因，PCR反應(yīng)體系需要加入的有機物有DNA模板、dNTP、耐高溫DNA聚合酶和____________。實驗過程中不能將BCD基因、F基因以及T基因直接導(dǎo)入到大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)，而是構(gòu)建重組質(zhì)粒后再導(dǎo)入大腸桿菌，原因是____________，并能遺傳給下一代.圖中兩個重組質(zhì)粒目的基因的首端都含有啟動子T7，T7是____________識別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄。

（2）將重組所粒1和重組質(zhì)粒2導(dǎo)入大腸桿菌時，應(yīng)用________處理大腸桿菌，使細(xì)胞處于________的感受態(tài)。

（3）為了篩選出同時含有BCD基因、F基因以及T基因的大腸桿菌，實驗的思路是_______________。

（4）研究發(fā)現(xiàn)巴豆甜菜堿轉(zhuǎn)化成L-肉堿是一個可逆反應(yīng)過程，得到的工程菌在含有巴豆甜菜堿培養(yǎng)基中培養(yǎng)2小時后，L-肉堿的含量基本穩(wěn)定，此時可以____________________________________，以提高產(chǎn)量。

Answer 1

【答案】 （兩種）引物 使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，能夠表達（使目的基因在受體細(xì)胞中完成轉(zhuǎn)化） RNA聚合酶 Ca2+ 易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子 在同時含有卡那霉素和氯霉素培養(yǎng)基上挑選單克隆大腸桿菌 及時移除產(chǎn)物（更換培養(yǎng)液），使反應(yīng)向生成L-肉堿的方向進行

【解析】試題分析：本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求學(xué)生識記基因工程的概念、原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)；了解基因工程技術(shù)的相關(guān)應(yīng)用，能結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確答題，有一定難度。

（1）多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR），是一種體外迅速擴增DNA片段的技術(shù)，它能以極少量的DNA為模板，在幾小時內(nèi)復(fù)制出上百萬份的DNA拷貝。它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的最大特點，是能將微量的DNA大幅增加。PCR反應(yīng)體系需要加入的有機物有DNA模板、dNTP、耐高溫DNA聚合酶和（兩種）引物。由于目的基因無法直接在受體細(xì)胞中表達，因此為了使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，能夠表達，實驗過程中不能將BCD基因、F基因以及T基因直接導(dǎo)入到大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)，而是構(gòu)建重組質(zhì)粒后再導(dǎo)入大腸桿菌。并能遺傳給下一代。圖中兩個重組質(zhì)粒目的基因的首端都含有啟動子T7，T7是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄。

（2）使體外重組的DNA分子轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞內(nèi)，主要是借鑒細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞的途徑。一般將受體大腸桿菌用Ca2+處理，使細(xì)胞處于易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)，使含有目的基因的重組質(zhì)粒容易進入受體細(xì)胞。

（3）重組質(zhì)粒1上含有BCD基因、T基因及卡那霉素抗性基因，重組質(zhì)粒2上含有F基因、T基因及氯霉素抗性基因，因此在同時含有卡那霉素和氯霉素培養(yǎng)基上挑選單克隆大腸桿菌，就是同時含有BCD基因、F基因以及T基因的大腸桿菌。

（4）研究發(fā)現(xiàn)巴豆甜菜堿轉(zhuǎn)化成L-肉堿是一個可逆反應(yīng)過程，在可逆反應(yīng)中，減少生成物濃度，可使反應(yīng)向正方向進行。因此得到的工程菌在含有巴豆甜菜堿培養(yǎng)基中培養(yǎng)2小時后，L-肉堿的含量基本穩(wěn)定，此時可以及時移除產(chǎn)物（更換培養(yǎng)液），使反應(yīng)向生成L-肉堿的方向進行，以提高產(chǎn)量。