Question

【題目】【生物—選修I:生物技術(shù)實踐】下圖是分離、純化及保存枯草芽抱桿菌菌株的過程示意圖:將土壤表層土稀釋液煮沸巧分鐘(枯草芽抱桿菌的芽抱不會失去活性)靜置5分鐘后獲得樣品，進行如下操作:

請回答下列問題:

(1)可知，除用選擇培養(yǎng)基外，還有__________起到篩選作用。

(2)上圖的劃線操作中，培養(yǎng)基從物質(zhì)狀態(tài)分類上屬于_______，接種環(huán)用____法進行滅菌，劃線過程中第一區(qū)和最后一區(qū)的劃線_______________(能/不能)相連。

(3)用稀釋涂布平板法在5個培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為104的樣品液0.1ml,培養(yǎng)一段時間后，平板長出來的菌落數(shù)分別為13. 160, 532, 175和187。每毫升樣品中的細菌數(shù)量為

_______________個。

(4)用上述方法統(tǒng)計出的菌落數(shù)往往比樣品中活菌的實際數(shù)目_____，原因是____。

Answer 1

【答案】 煮沸 固體培養(yǎng)基 灼燒滅菌（灼燒） 不能 1.74×107 少 兩個或者多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落

【解析】試題分析：微生物的接種方法：平板劃線法和稀釋涂布法。
（1）平板劃線操作：
①挑取他含菌樣品：選用平整、圓滑的接種環(huán)，按無菌操作法挑取少量菌種。
②劃A區(qū)：將平板倒置于煤氣（酒精）燈旁,左手拿出皿底并盡量使平板垂直于桌面，有培養(yǎng)基一面向著煤氣燈（這時皿蓋朝上，仍留在煤氣燈旁)，右手拿接種環(huán)先在A區(qū)劃3—4條連續(xù)的平行線(線條多少應依挑菌量的多少面定）。劃完A區(qū)后應立即燒掉環(huán)上的殘菌，以免因菌過多而影響后面各區(qū)的分離效果。在燒接種環(huán)時，左手持皿底并將其覆蓋在皿蓋上方(不要放入皿蓋內(nèi))，以防止雜菌的污染。
③劃其他區(qū)：將燒去殘菌后的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基邊緣冷卻一下，并使B區(qū)轉(zhuǎn)到上方，接種環(huán)通過A區(qū)（菌源區(qū)）將菌帶到B區(qū)，隨即劃數(shù)條致密的平行線。再從B區(qū)作C區(qū)的劃線。最后經(jīng)C區(qū)作D區(qū)的劃線，D區(qū)的線條應與A區(qū)平行，但劃D區(qū)時切勿重新接觸A、B區(qū)，以免極該兩區(qū)中濃密的菌液帶到D區(qū)，影響單菌落的形成。隨即將皿底放入皿蓋中。燒去接種環(huán)上的殘菌。
④等平板凝固后，將平板倒置。
（2）稀釋涂布法：是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，在適宜條件下培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落。能夠測定樣品中活菌數(shù)的方法是：稀釋涂布平板法。

（1）枯草芽抱桿菌的芽抱耐高溫，所以煮沸可以殺滅枯草芽抱桿菌的芽抱以外的雜菌，起到選擇作用。

（2）平板劃線法用的是固體培養(yǎng)基，劃線前需要用灼燒的方法對接種環(huán)滅菌。劃線時要避免最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)線連，因為最后一區(qū)是細菌最稀少的，而第一區(qū)是細菌最致密的，如果連在一起則有可能影響單個菌落的分離效果。

（3）根據(jù)題干信息，五個數(shù)值中13和532相差太大，不予計算，所以每毫升樣品中的細菌數(shù)量=平板上菌落數(shù)的平均值÷體積×稀釋倍數(shù)=（160+175+187）÷3×104÷0.1=1.74×107個。

（4）由于兩個或者多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，所以用上述方法統(tǒng)計出的菌落數(shù)往往比樣品中活菌的實際數(shù)目少。