Question

下圖為綠色熒光小鼠制備流程圖，Gfp是綠色熒光蛋白基因，請分析回答：

（1）構(gòu)建表達(dá)載體需要的酶是：????????????????????????? ，表達(dá)載體包含綠色熒光蛋白基因Gfp、??????????? 、???????? 、終止子和復(fù)制原點(diǎn)等。

（2）圖中載體上的NEO基因是一種抗生素抗性基因，圖中步驟③所用的G418 是一種抗生素（對細(xì)胞有毒害作用），添加G418的目的是_?????????????????????????????????? 。

（3）圖中所用的胚胎干細(xì)胞來自于??????????????? 。

（4）圖中步驟⑤要將細(xì)胞注射入圖中囊胚的??????????? 位置，圖中步驟⑥胚胎移植前要對代孕母鼠用激素處理，目的是??????????????? 。

（5）可以使用?????????? __方法在蛋白質(zhì)水平上鑒定小鼠是否存在綠色熒光蛋白。

 

Answer 1

【答案】

（1）限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶、標(biāo)記基因、啟動(dòng)子（2）篩選出導(dǎo)入目的基因的胚胎干細(xì)胞（3）早期胚胎或原始性腺（4）內(nèi)細(xì)胞團(tuán)?? 同期發(fā)情處理（5）抗原-抗體雜交

【解析】

試題分析:（1）構(gòu)建表達(dá)載體需要限制性核酸內(nèi)切酶進(jìn)行切割，目的基因與運(yùn)載體結(jié)合也離不開DNA連接酶。基因表達(dá)載體必不可少的幾部分包括標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子和復(fù)制原點(diǎn)等。（2）導(dǎo)入目的基因的會表現(xiàn)出抗生素的抗性來，添加G418的目的是選出導(dǎo)入目的基因的胚胎干細(xì)胞。（3）胚胎干細(xì)胞可從早期胚胎或原始性腺中獲得。（4）囊胚期的細(xì)胞已經(jīng)開始分化為內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)層細(xì)胞。將目的基因要注入內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的位置。對代孕的母鼠要用激素處理，目的是同期發(fā)情處理，處于相同的生理狀態(tài)。（5）對目的基因的檢測和鑒定分為三步：首先用DNA分子雜交技術(shù)檢測是否插入目的基因；其次用分子雜交技術(shù)檢測是否轉(zhuǎn)錄出來mRNA;最后用抗原-抗體雜交技術(shù)檢測是否翻譯成蛋白質(zhì)。

考點(diǎn)：本題考查了基因工程的相關(guān)知識。意在考查考生的理解能力及理論聯(lián)系實(shí)際，運(yùn)用所學(xué)知識解決自然界中的一些生物學(xué)問題的能力。