（15分）下圖為綠色熒光小鼠制備流程圖， Gfp是綠色熒光蛋白基因，請(qǐng)分析回答：

（1）構(gòu)建表達(dá)載體需要的酶是：????????????????????????? ，表達(dá)載體包含綠色熒光蛋白基因Gfp、??????????? 、???????? 、終止子和復(fù)制原點(diǎn)等。

（2）圖中載體上的NEO基因是一種抗生素抗性基因，圖中步驟③所用的G418是一種抗生素（對(duì)細(xì)胞有毒害作用），添加G418的目的是_?????????????????????????????????? 。

（3）圖中所用的胚胎干細(xì)胞來(lái)自于?????????????? 。

（4）圖中步驟⑤要將細(xì)胞注射入圖中囊胚的??????????? 位置，圖中步驟⑥胚胎移植前要對(duì)代孕母鼠用激素處理，目的是??????????????? 。

（5）可以使用?????????? __方法在蛋白質(zhì)水平上鑒定小鼠是否存在綠色熒光蛋白。

 

【答案】

（1）限制酶、DNA連接酶??? 標(biāo)記基因?? 啟動(dòng)子 （2）篩選出導(dǎo)入目的基因的胚胎干細(xì)胞（3）早期胚胎或原始性腺（4）內(nèi)細(xì)胞團(tuán)?? 同期發(fā)情處理? （5）抗原－抗體雜交

【解析】

試題分析：（1）基因工程中，基因表達(dá)載體的構(gòu)建需要限制酶、DNA連接酶。表達(dá)載體包括啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因、目的基因。（2）NEO基因是一種抗生素抗性基因，而G418 是一種抗生素（對(duì)細(xì)胞有毒害作用），所以添加G418可將導(dǎo)入目的基因的胚胎干細(xì)胞篩選出來(lái)。（3）胚胎干細(xì)胞來(lái)自早期胚胎或原始性腺。（4）內(nèi)細(xì)胞團(tuán)將發(fā)育成各種組織和器官，所以應(yīng)注射入內(nèi)細(xì)胞團(tuán)中，胚胎移植前要進(jìn)行同期發(fā)情處理。（5）在蛋白質(zhì)水平鑒定蛋白質(zhì)采用抗原－抗體雜交方法。

考點(diǎn)：本題考查基因工程和胚胎工程，意在考查考生識(shí)記所列知識(shí)點(diǎn)，并能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)做出合理的判斷或得出正確的結(jié)論的能力。

 

練習(xí)冊(cè)系列答案
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（8分）【生物—現(xiàn)代生物科技專題】
下圖是轉(zhuǎn)基因綠色熒光鼠的培育過(guò)程，據(jù)圖回答相關(guān)問題：

（1）若需在短時(shí)間內(nèi)獲得較多的GFP基因，通常采用_________技術(shù)。
（2）過(guò)程①是轉(zhuǎn)基因技術(shù)的核心步驟，為使GFP基因在小鼠細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把GFP基因片段正確插入表達(dá)載體的_________和___________之間。
（3）③過(guò)程在使用合成培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，通常需要加入     等天然成分。
（4）②過(guò)程通常采用的技術(shù)是____________________；在個(gè)體水平上檢測(cè)GFP基因是否表達(dá)的方法是                。
（5）④過(guò)程通過(guò)         技術(shù)實(shí)現(xiàn)�？茖W(xué)家欲獲得多個(gè)相同性狀的綠色熒光小鼠，則應(yīng)該選擇發(fā)育良好、形態(tài)正常的桑椹胚或       ，將其移入盛有操作液的培養(yǎng)皿中，然后用分割針進(jìn)行分割。

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2008年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)授予三位在研究綠色熒光蛋白（GFP）方面做出突出貢獻(xiàn)的科學(xué)家。綠色熒光蛋白（GFP）會(huì)發(fā)出綠色熒光，可借助熒光跟蹤蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)部的移動(dòng)情況，幫助推斷蛋白質(zhì)的功能。下圖表示培育綠色熒光小鼠的基本流程：
                      ①          ②          ③         ④         ⑤
請(qǐng)根據(jù)上述材料回答下列問題：
（1）上述流程中，作為目的基因的是＿＿＿＿＿＿＿＿。
（2）在培育綠色熒光小鼠的工程中，基因表達(dá)載體的構(gòu)建是核心。一個(gè)完整的基因表達(dá)載體至少包括目的基因、啟動(dòng)子、＿＿＿＿基因等部分。
（3）過(guò)程①用到的工具酶有＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿ ，過(guò)程②采用的方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿，過(guò)程④利用的生物技術(shù)是＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
（4）為迅速增加綠色熒光小鼠的數(shù)量，可采用試管動(dòng)物技術(shù)。在這項(xiàng)技術(shù)中，首先要做的是體外受精和＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。哺乳動(dòng)物的體外受精主要包括＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿、精子的獲取和受精等幾個(gè)主要步驟。
（5）為提高胚胎的利用率，可采用＿＿＿＿＿＿＿＿技術(shù)，應(yīng)該選擇發(fā)育良好、形態(tài)正常的＿＿＿＿＿＿＿＿或囊胚進(jìn)行分割。在對(duì)囊胚階段的胚胎進(jìn)行分割時(shí)，要注意將＿＿＿＿＿＿＿＿進(jìn)行均等分割。

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請(qǐng)根據(jù)上述材料回答下列問題：
(1)上述流程中，作為目的基因的是        。
(2)在培育綠色熒光小鼠的過(guò)程中，基因表達(dá)載體的構(gòu)建是核心。一個(gè)完整的基因表達(dá)    載體至少包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子、        基因等部分。
(3)過(guò)程①用到的工具酶有        ，過(guò)程②采用的方法是        ，過(guò)程③利用的生物技術(shù)是        。
(4)為迅速增加綠色熒光小鼠的數(shù)量，可采用試管動(dòng)物技術(shù)。在這項(xiàng)技術(shù)中，首先要做的是體外受精和早期胚胎的培養(yǎng)。哺乳動(dòng)物的體外受精主要包括          、精子的獲取和受精等幾個(gè)主要步驟。
(5)為提高胚胎的利用率，可采用      技術(shù)，應(yīng)該選擇發(fā)育良好、形態(tài)正常的     或囊胚進(jìn)行分割。在對(duì)囊胚階段的胚胎進(jìn)行分割時(shí)，要注意將        進(jìn)行均等分割。

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（1）構(gòu)建表達(dá)載體需要的酶是：????????????????????????? ，表達(dá)載體包含綠色熒光蛋白基因Gfp、??????????? 、???????? 、終止子和復(fù)制原點(diǎn)等。

（2）圖中載體上的NEO基因是一種抗生素抗性基因，圖中步驟③所用的G418 是一種抗生素（對(duì)細(xì)胞有毒害作用），添加G418的目的是_?????????????????????????????????? 。

（3）圖中所用的胚胎干細(xì)胞來(lái)自于??????????????? 。

（4）圖中步驟⑤要將細(xì)胞注射入圖中囊胚的??????????? 位置，圖中步驟⑥胚胎移植前要對(duì)代孕母鼠用激素處理，目的是??????????????? 。

（5）可以使用?????????? __方法在蛋白質(zhì)水平上鑒定小鼠是否存在綠色熒光蛋白。

 

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