Question

7.（14分）人外周血單核細胞能合成白細胞介素2（IL-2）。該蛋白為淋巴因子，可增強機體免疫功能，但在體內(nèi)易被降解。研究人員將IL-2基因與人血清白蛋白（HSA）基因拼接成一個融合基因，在酵母菌中表達出具有IL-2生理功能、且不易降解的IL-2- HSA融合蛋白。技術(shù)流程如右圖。請回答：

（1）從健康人外周血分離得到的單核細胞，應(yīng)置于                            氣體環(huán)境中，并在適宜溫度和pH條件下培養(yǎng)48h。提取細胞總RNA，生成cDNA。圖中PCR過程的模板是                        。

（2）表達載體1中的位點a應(yīng)含有圖中           酶的識別序列，才能成功構(gòu)建表達載體2。

（3）表達載體2導(dǎo)入酵母菌后，融合基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA中，與IL-2蛋白對應(yīng)的堿基序列中不能含有          密碼，才能成功表達出IL-2-HSA融合蛋白。

（4）白細胞介素在單核細胞內(nèi)合成的直接模板是             ，在體液免疫過程中，白細胞介素可作用于受抗原刺激的B細胞，使B細胞增殖、分化，形成                細胞。

（5）將表達載體2導(dǎo)入酵母細胞，在培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時間后離心，取                

（上清液/菌體）進行產(chǎn)物鑒定。

Answer 1

【答案】

7.（14分）

（1）95%空氣和5%CO₂        含有目的基因(IL-2基因)的cDNA    

（2）限制酶BglⅡ      

（3）終止

（4）mRNA       漿細胞和記憶細胞    

（5）上清液

【解析】(1) 從健康人外周血分離得到的單核細胞，應(yīng)置于95%空氣和5%CO₂氣體環(huán)境中，并在適宜溫度和pH條件下培養(yǎng)48h。圖中PCR過程的模板是含有目的基因(IL-2基因)的cDNA。由mRNA到cDNA的過程是反轉(zhuǎn)錄過程。

(2)根據(jù)圖解可知目的基因的兩端分別是由限制酶EcoRⅠ、BglⅡ切割的，同一限制酶切割才能形成相同的黏性末端，表達載體1中具有EcoRⅠ的識別位點，因此位點a應(yīng)與限制酶BglⅡ的識別位點相同，才能成功構(gòu)建表達載體2。

(3)mRNA中如果含有終止密碼子，則會導(dǎo)致翻譯終止，不能合成目的蛋白。

(4) 白細胞介素在單核細胞內(nèi)合成的直接模板是mRNA ，在體液免疫過程中，白細胞介素可作用于受抗原刺激的B細胞，使B細胞增殖、分化，形成漿細胞和記憶細胞。

（5）檢測蛋白質(zhì)，可以利用蛋白質(zhì)作為抗原，導(dǎo)致機體產(chǎn)生抗體進行檢測，由于抗體具有專一性，因此抗原—抗體雜交技術(shù)可以迅速檢測出酵母菌是否表達出IL－2－HSA融合蛋白，在培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時間后離心，取上清液進行產(chǎn)物鑒定。