Question

【題目】為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上的轉(zhuǎn)運肽基因相連，導入油菜葉片細胞并獲得了轉(zhuǎn)基因油菜品種．

（1）選用圖中的限制酶處理兩個基因后，再用DNA連接酶處理，得到（填圖中字母）端相連的融合基因．
（2）將上述融合基因插入如圖所示質(zhì)粒的T﹣DNA中，構建 ， 并導入農(nóng)桿菌中．將獲得的農(nóng)桿菌接種在含的固體平板上培養(yǎng)得到含融合基因的單菌落，再利用培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的浸染液．
（3）剪取油菜的葉片放入染液中一段時間后篩選獲得轉(zhuǎn)基因油菜細胞．該細胞通過技術，可培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株．
（4）提取上述轉(zhuǎn)基因油菜的mRNA，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下獲得cDNA，再利用的DNA片段設計引物進行擴增．對擴增結果進行檢測，可判斷融合基因是否完成 ．

Answer 1

【答案】
（1）Cla I；A，D
（2）基因表達載體（重組質(zhì)粒）；四環(huán)素
（3）植物組織培養(yǎng)
（4）融合基因；轉(zhuǎn)錄
【解析】解：（1）在上述引物設計時，分別在引物中加入如圖甲所示酶的識別序列，這樣可以用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個基因后，得到A、D端相連的融合基因．（2）將上述融合基因插入圖乙所示Ti質(zhì)粒的T﹣DNA中，構建表達載體即重組質(zhì)粒并導入農(nóng)桿菌中．將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的浸染液．（3）剪取油菜的葉片放入染液中一段時間后篩選獲得轉(zhuǎn)基因油菜細胞．該細胞通過植物組織培養(yǎng)技術，可培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株．（4）提取上述轉(zhuǎn)基因油菜的mRNA，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下獲得cDNA，再依據(jù)融合基因的DNA片段設計引物進行擴增，對擴增結果進行檢測，可判斷融合基因是否完成轉(zhuǎn)錄．
所以答案是：（1）Cla I A，D（全對才得分）（2）基因表達載體（重組質(zhì)粒） 四環(huán)素（3）植物組織培養(yǎng)（4）融合基因 轉(zhuǎn)錄
【考點精析】本題主要考查了基因工程的原理及技術的相關知識點，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術才能正確解答此題．