Question

【題目】請回答基因工程相關(guān)問題：

（1）限制酶切割DNA分子時，斷裂的是___________鍵為了保證目的基因與載體的正確連接，通常用兩種_________________________________不同的限制酶同時處理含目的基因的DNA片段與載體

（2）若要通過反轉(zhuǎn)錄得到胰島素基因，可從人體的___________細胞中提取mRNA提取mRNA時，在提取液中一般要加入RNA酶抑制劑，其目的是______________________若要在體外得到大量胰島素基因，可采用______________________技術(shù)，該技術(shù)過程中設(shè)計引物時______________________（填“需要”或“不需要”）知道胰島素基因的全部序列

（3）將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌時，大腸桿菌本身___________（填“含有”或“不含有”）質(zhì)粒一般情況下不能用未經(jīng)處理的大腸桿菌作為受體細胞，原因是______________________。

Answer 1

【答案】磷酸二酯 識別序列和切割位點 胰島B 防止mRNA（RNA）被降解 PCR 不需要 不含有 未經(jīng)處理的大腸桿菌吸收外源DNA的能力較弱

【解析】

1、限制酶能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂。

2、PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)。PCR技術(shù)的原理是DNA復(fù)制，需要的條件有：模板DNA（目的基因所在的DNA片段）、原料（四種脫氧核苷酸）、一對引物（單鏈的脫氧核苷酸序列）、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）。

（1）根據(jù)限制酶的作用可知，限制酶切割DNA分子時，斷裂的是磷酸二酯鍵由于同種限制酶切割得到的目的基因或質(zhì)粒的兩端黏性末端相同，會出現(xiàn)自體相連的現(xiàn)象，所以為了保證目的基因與載體的正確連接，通常用兩種識別序列和切割位點不同的限制酶同時處理含目的基因的DNA片段與載體

（2）由于胰島素基因只在胰島B細胞中表達，所以若要通過反轉(zhuǎn)錄得到胰島素基因，可從人體的胰島B細胞中提取mRNA提取mRNA時，在提取液中一般要加入RNA酶抑制劑，其目的是防止mRNA（RNA）被降解�？刹捎�PCR技術(shù)在體外擴增目的基因。在利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，只需要一段已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物，而不需要知道胰島素基因的全部序列

（3）質(zhì)粒上的抗性基因一般用作標(biāo)記基因，為了便于篩選導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，在將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌時，所選的大腸桿菌本身一般不含有質(zhì)粒若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細胞，原因是未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒（外源DNA）的能力極弱，常用Ca2+處理使之成為易于吸收外源DNA的感受態(tài)細胞。