Question

【題目】下圖為將人的生長激素基因?qū)�入細菌B細胞內(nèi)制“工程菌“的示意圖。已知細菌B細胞內(nèi)不含質(zhì)粒A，也不含質(zhì)粒A上的基因。請完成下列題目：

（1）圖中從質(zhì)粒A到重組質(zhì)粒，需要的工具酶有________________、__________________。

（2）圖中目的基因為_________________，為方便后續(xù)能表達出正確的產(chǎn)物，該目的基因的方法最好通過________________（從基因組文庫中、PCR擴增、反轉錄法）獲取。

（3）將完成導入過程的細菌涂布在含有______________的培養(yǎng)基上，目的是__________。

（4）若某細菌在含有四環(huán)素和氨芐青霉素的培養(yǎng)基上存活，則可能原因為_____________。（不考慮突變，答出一點即可）

Answer 1

【答案】限制酶 DNA連接酶 （人的）生長激素基因 反轉錄法 氨芐青霉素 篩選出含有重組質(zhì)粒（或目的基因）的大腸桿菌 導入的DNA為未連接目的基因的質(zhì)粒 / 導入的DNA為自身環(huán)化的質(zhì)粒

【解析】

分析題圖：圖示表示將人的生長激素基因?qū)�入細菌B細胞內(nèi)制造“工程菌”的過程。質(zhì)粒A上含有四環(huán)素抗性基因和氨芐青霉素抗性基因，構建基因表達載體后，破環(huán)了質(zhì)粒A的四環(huán)素抗性基因，但氨芐青霉素抗性基因正常，所以導入重組質(zhì)�；蚱胀ㄙ|(zhì)粒的大腸桿菌都能抗氨芐青霉素，但導入重組質(zhì)粒的大腸桿菌不能抗四環(huán)素。

（1）圖中從質(zhì)粒A到重組質(zhì)粒，需要對目的基因的切割和連接在質(zhì)粒中，所以需要的工具酶有限制酶和DNA連接酶。

（2）圖中目的基因為人的生長激素基因，為方便后續(xù)能表達出正確的產(chǎn)物，獲取該目的基因的方法最好通過反轉錄法，因為反轉錄的目的基因不含內(nèi)含子，能在原核細胞內(nèi)得以正確表達。

（3）結合前面的分析可知，將完成了導入過程的細菌涂布在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上，目的是為了淘汰沒有導入質(zhì)粒的細菌，從而篩選出含有重組質(zhì)粒（或目的基因）的大腸桿菌。

（4）若某細菌在含有四環(huán)素和氨芐青霉素的培養(yǎng)基上存活，則說明導入細菌內(nèi)的質(zhì)粒中完整的四環(huán)素抗性基因和氨芐青霉素抗性基因，可能的原因是導入的DNA為未連接目的基因的質(zhì)�；�?qū)�入的DNA為自身環(huán)化的質(zhì)粒。