Question

【題目】為了研究如何提高油菜種子的含油量，研究者將轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因與酶D基因相連，導(dǎo)入油菜細(xì)胞并獲得了轉(zhuǎn)基因油菜．請(qǐng)據(jù)圖回答：
（1）研究人采用PCR技術(shù)獲取酶D基因和轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因，該技術(shù)是利用的原理，使相應(yīng)基因呈指數(shù)增加．此技術(shù)中最重要的酶是 ． 三種限制酶（Xbal、Clal、SacI）的切點(diǎn)如圖所示，則用和酶處理兩個(gè)基因后，可得到兩基因相連的融合基因．
（2）將上述融合基因插入如圖所示Ti質(zhì)粒的中構(gòu)建基因表達(dá)載體，說明此結(jié)構(gòu)的兩端有和酶的切割序列．然后把重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌中，為了獲得含融合基因的單菌落，應(yīng)進(jìn)行的操作是 ， 然后再利用液體培養(yǎng)基將該單菌落振蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的侵染液．
（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時(shí)間，此過程的目的是 ， 進(jìn)一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜細(xì)胞，依據(jù)的原理，可將其培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株．
（4）用法可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因油菜植株中的融合基因是否成功表達(dá)．

Answer 1

【答案】
（1）DNA復(fù)制；耐高溫的DNA聚合酶；ClaⅠ；DNA連接
（2）T﹣DNA；XbaⅠ；SacⅠ；將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)
（3）利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜�?xì)胞；細(xì)胞具有全能性
（4）抗原﹣抗體雜交
【解析】解：（1）PCR技術(shù)利用的原理是DNA雙鏈復(fù)制，從擬南芥基因文庫(kù)中獲取轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因．此技術(shù)中最重要的酶是耐高溫的DNA聚合酶．用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個(gè)基因后，可以得到A、D端相連的融合基因．（2）將上述融合基因插入圖中Ti質(zhì)粒的T﹣DNA中，能夠構(gòu)建表達(dá)載體即重組質(zhì)粒，說明此結(jié)構(gòu)的兩端有XbaⅠ和SacⅠ酶的切割序列．將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的浸染液．（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時(shí)間，此過程的目的是利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜�?xì)胞，進(jìn)一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜細(xì)胞．依據(jù)細(xì)胞具有全能性的原理，通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)，可培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株．（4）用抗原﹣抗體雜交法可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因油菜植株中的融合基因是否成功表達(dá)．
【考點(diǎn)精析】本題主要考查了基因工程的原理及技術(shù)的相關(guān)知識(shí)點(diǎn)，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)才能正確解答此題．